[發(fā)明專利]一種液基薄層細(xì)胞制片的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910631022.0
• 申請(qǐng)日: 2019-07-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110398401A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙路;陳水煜;湯哲文;賈磊;鐘娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海晶鑄生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28
• 代理公司: 上海段和段律師事務(wù)所 31334
• 代理人: 陳少凌;郭國(guó)中

本發(fā)明公開(kāi)了一種液基薄層細(xì)胞制片的方法；所述方法包括：將預(yù)處理后的樣本逐個(gè)放入板條，并將板條逐個(gè)上機(jī)；轉(zhuǎn)移樣本至轉(zhuǎn)樣杯；對(duì)轉(zhuǎn)樣杯中的樣本進(jìn)行樣本處理；處理后的樣本加樣至沉降倉(cāng)，靜置沉降，吸去上清；巴氏染色；將巴氏染色后的玻片轉(zhuǎn)移出沉降倉(cāng)，液體封片。本發(fā)明優(yōu)化了制片的步驟，增加了樣本處理的過(guò)程，沖洗紅細(xì)胞去除，換緩沖液加PBS，磁珠去除大部分白細(xì)胞干擾等步驟，大大提高了制片的質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種液基薄層細(xì)胞制片的方法。

背景技術(shù)

婦女發(fā)展綱要(2011-2020)宮頸癌篩查覆蓋率需達(dá)到80％，基于我國(guó)女性人口總數(shù)約6.5億，30％從來(lái)沒(méi)有進(jìn)行過(guò)篩查的事實(shí)基礎(chǔ)，目前篩查率遠(yuǎn)低于這一水平。主要是因?yàn)槭止げ僮鞫啵舾行圆睿禺愋圆畹葐?wèn)題。

液基薄層細(xì)胞檢測(cè)工作原理為通過(guò)采集陰道或?qū)m頸分泌物，獲得脫落細(xì)胞后浸入液基細(xì)胞處理試劑中進(jìn)行處理，試劑中的裂解成分能對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行裂解，去除紅細(xì)胞對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成的干擾；同時(shí)試劑中的固定成分能保存固定白細(xì)胞、脫落上皮細(xì)胞等有價(jià)值的細(xì)胞；并使包裹在黏液中的有效細(xì)胞充分分離出來(lái)，防止有價(jià)值細(xì)胞的丟失。將有效細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液，最后通過(guò)過(guò)濾離心方法清除黏液對(duì)制片的干擾，制成脫落細(xì)胞薄片。可用HE染色、巴氏染色或其他免疫組織化學(xué)染色等方法使細(xì)胞著色，再通過(guò)人工觀察分析來(lái)檢查陰道或?qū)m頸的細(xì)胞形態(tài)，診斷子宮頸癌及其癌的前期變化、人乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒感染。其中，液基細(xì)胞制片是后續(xù)染色及診斷的基礎(chǔ)保障，只有合格的涂片才能正確反映病理狀態(tài)，幫助醫(yī)生做出正確診斷。

通過(guò)對(duì)現(xiàn)有專利文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，申請(qǐng)?zhí)?01110056356.3的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)公開(kāi)了一種自動(dòng)制作液基細(xì)胞的制片方法；其通過(guò)分離細(xì)胞、過(guò)濾沉降、提取細(xì)胞液、離心制片步驟，可在一臺(tái)設(shè)備上進(jìn)行自動(dòng)制片，其自動(dòng)化程度高，省時(shí)、省工、快速、高效。制片數(shù)量靈活，可一次制作多個(gè)玻片，適用范圍廣，自動(dòng)精確地確定細(xì)胞提取量，細(xì)胞層薄，一致性好，背景干凈，保證了玻片上的細(xì)胞轉(zhuǎn)移數(shù)量均勻和一致性。然而，該方法并沒(méi)有對(duì)樣本進(jìn)行處理，這時(shí)樣本中依然有很多的白細(xì)胞和紅細(xì)胞，影響觀察。并且這里制片結(jié)束，沒(méi)有實(shí)現(xiàn)染色和封片，沒(méi)有真正實(shí)現(xiàn)整個(gè)流程的自動(dòng)化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種液基薄層細(xì)胞制片的方法。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明涉及一種液基薄層細(xì)胞制片的方法，所述方法包括如下步驟：

S1、將預(yù)處理后的樣本逐個(gè)放入板條，并將板條逐個(gè)上機(jī)；

S2、轉(zhuǎn)移樣本至轉(zhuǎn)樣杯；對(duì)轉(zhuǎn)樣杯中的樣本進(jìn)行樣本處理；

S3、處理后的樣本加樣至沉降倉(cāng)，靜置沉降，吸去上清；

S4、巴氏染色；

S5、將巴氏染色后的玻片轉(zhuǎn)移出沉降倉(cāng)，液體封片。

優(yōu)選的，步驟S1中，所述預(yù)處理包括樣本整理、擺放、掃碼。

優(yōu)選的，步驟S2中，所述樣本處理包括37℃孵育，反應(yīng)體系切換，沖洗紅細(xì)胞去除，換PBS緩沖液，加入磁珠去除白細(xì)胞干擾。

目前現(xiàn)有技術(shù)中，液基薄層細(xì)胞制片時(shí)通常做法是不做任何處理，這樣就造成了樣本中原本存在的紅細(xì)胞和白細(xì)胞會(huì)干擾制片質(zhì)量或者增加操作難度。

優(yōu)選的，所述37℃孵育的時(shí)間為8-12min。

優(yōu)選的，所述反應(yīng)體系切換為生理鹽水體系。

優(yōu)選的，所述沖洗紅細(xì)胞去除采用的沖洗液為生理鹽水；沖洗時(shí)間為3-5min。

優(yōu)選的，步驟S4中，所述巴氏染色包括如下步驟：

A1、步驟S3中樣本靜置沉降，吸去上清后置入無(wú)水乙醇或異丙醇8-12秒；