[發明專利]長期擴增粒細胞-巨噬細胞祖細胞的方法及其應用

在審

• 申請號: 201910630151.8
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN111004781A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 應其龍;岳師
• 申請（專利權）人: 南加利福尼亞大學
• 主分類號: C12N5/0787
• 分類號: C12N5/0787;C12N5/0786;C12N15/90;C12N5/10;A61K35/15
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 閻娬斌;劉丹丹

1.一種擴增粒細胞/巨噬細胞祖細胞(GMP)群的方法，其包含：

在培養基中培養GMP，所述培養基包含：

(i)生長因子，

(ii)B-Raf激酶抑制劑，以及

(iii)Wnt激活劑和/或GSK-3抑制劑，

其中，所述GMP在經歷多次細胞傳代和/或克隆擴增后形態保持基本不變。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述GMP來源于干細胞或是從干細胞獲得的。

3.根據權利要求2所述的方法，其中在培養之前或期間對所述干細胞進行遺傳工程改造。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述干細胞是造血干細胞。

5.根據權利要求2至4中任一項所述的方法，其中所述造血干細胞分離自受試者的骨髓。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述受試者是哺乳動物受試者。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述受試者是人、大鼠或小鼠。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述培養基包含DMEM/F12和神經基礎培養基。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述培養基包含比例為約5:1至約1:5的DMEM/F12和神經基礎培養基。

10.根據權利要求9所述的方法，其中所述培養基包含比例為約1:1的DMEM/F12和神經基礎培養基。

11.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述培養基包含選自胰島素、轉鐵蛋白、BSA組分V、腐胺、亞硒酸鈉、DL-α生育酚和/或亞麻酸的一種或多種補充物。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述培養基補充有胰島素、轉鐵蛋白、BSA組分V、腐胺、亞硒酸鈉、DL-α生育酚和亞麻酸。

13.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述生長因子是干細胞因子(SCF)。

14.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述B-Raf激酶抑制劑選自GDC-0879、PLX4032、GSK2118436、BMS-908662、LGX818、PLX3603、RAF265、RO5185426、威羅菲尼、PLX8394、SB590885以及它們的任意組合。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述B-Raf激酶抑制劑是GDC-0879。

16.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述Wnt激活劑選自SKL 2001、BML-284、WAY 262611、CAS 853220-52-7、QS11以及它們的任意組合。

17.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述Wnt激活劑是SKL 2001。

18.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述GSK-3抑制劑選自CHIR99021、CHIR98014、SB216763、BIO、A1070722、AR-A014418以及它們的任意組合。

19.根據權利要求18所述的方法，其中所述GSK-3抑制劑是CHIR99021。

20.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述GMP具有小、圓形的和/或非附著的均一形態。