[發明專利]長期擴增粒細胞-巨噬細胞祖細胞的方法及其應用

在審

• 申請號: 201910630151.8
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN111004781A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 應其龍;岳師
• 申請（專利權）人: 南加利福尼亞大學
• 主分類號: C12N5/0787
• 分類號: C12N5/0787;C12N5/0786;C12N15/90;C12N5/10;A61K35/15
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 閻娬斌;劉丹丹

本公開提供了粒細胞?巨噬細胞祖細胞，由其產生的粒細胞?巨噬細胞祖細胞的長期擴增的方法，以及其粒細胞巨噬細胞祖細胞的用途。

相關申請的交叉引用

本申請要求2018年10月8日提交的序號為62/742,887，US的臨時申請的優先權，其公開內容通過引用并入本文。

技術領域

本公開提供了長期擴增粒細胞-巨噬細胞祖細胞的的方法、由此產生的粒細胞-巨噬細胞祖細胞以及粒細胞-巨噬細胞祖細胞的用途。

背景技術

粒細胞、巨噬細胞和樹突細胞是人類先天免疫系統的重要組成部分。它們是抵御病原體的第一道防線，在維持我們身體的體內穩態和預防包括感染、代謝疾病和癌癥的各種疾病方面發揮著核心作用。這些細胞來源于骨髓中的共同祖細胞，即粒細胞-巨噬細胞祖細胞(GMP)。

發明內容

本文提供了能夠擴增粒細胞/巨噬細胞祖細胞(GMP)的方法，例如，GMP的長期擴增和克隆性擴增。這些方法通常適用于由任何數量的受試者來源(包括小鼠、大鼠、人等)來生成GMP的長期和克隆性擴增。在一些實施例中，通過本公開的方法生成的GMP的許多優點之一是GMP易受遺傳修飾技術的影響，從而允許將GMP用于基礎科學研究和臨床治療的應用。因此，擴增和遺傳修飾了的GMP可以容易地轉化為廣泛的臨床應用。例如，可以對人GMP進行遺傳修飾，使它們分化成巨噬細胞(例如，敲除SIRPα和/或PI3Kγ基因)。這些工程化的巨噬細胞可能或預期具有增強的抗腫瘤作用，并且可以作為單一療法或與其他免疫劑的組合療法在臨床上用于治療癌癥，諸如與抗-PD-1/PD-L1抗體和嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞聯合。此外，離體擴增的人GMP可以容易地用于灌注或移植來治療由于例如化療、放療等引起的中性粒細胞減少。這種離體擴增的GMP可以是自體的或者受試者同種異體的。

本公開提供了一種擴增粒細胞/巨噬細胞祖細胞(GMP)群的方法，其包含在培養基中培養GMP，所述培養基包含：(i)生長因子，(ii)B-Raf激酶抑制劑，以及(iii)Wnt激活劑和/或GSK-3抑制劑，其中，GMP在經歷多次細胞傳代和/或克隆擴增后形態基本上保持不變。在一個實施例中，GMP衍生自或者獲自干細胞。在另一個實施例中，在培養之前或期間對干細胞進行基因工程改造。在又一個或另一個實施例中，干細胞是造血干細胞。在又一個或另一個實施例中，造血干細胞是從受試者的骨髓中分離的。在另一個實施例中，受試者是哺乳動物受試者。在又一個或另一個實施例中，受試者是人、大鼠或小鼠。在又一個或另一個實施例中，培養基包含DMEM/F12和神經基礎培養基。在又一個或另一個實施例中，培養基包含比例為約5:1至約1:5的DMEM/F12和神經基礎培養基。在又一個或另一個實施例中，培養基包含比例為約1:1的DMEM/F12和神經基礎培養基。在又一個或另一個實施例中，培養基包含一種或多種補充物，補充物選自胰島素、轉鐵蛋白、BSA組分V、腐胺、亞硒酸鈉、DL-α生育酚和/或亞麻酸。在又一個或另一個實施例中，培養基補充有胰島素、轉鐵蛋白、BSA組分V、腐胺、亞硒酸鈉、DL-α生育酚以及亞麻酸。在又一個或另一個實施例中，生長因子是干細胞因子(SCF)。在又一個或另一個實施例中，B-Raf激酶抑制劑選自GDC-0879、PLX4032、GSK2118436、BMS-908662、LGX818、PLX3603、RAF265、RO5185426、威羅菲尼、PLX8394、SB590885以及它們的任何組合。在又一個或另一個實施例中，B-Raf激酶抑制劑是GDC-0879。在又一個或另一個實施例中，Wnt激活劑選自SKL 2001、BML-284、WAY 262611、CAS853220-52-7、QS11以及它們的任何組合。在又一個或另一個實施例中，Wnt激活劑是SKL2001。在任一個前述實施例的又一個實施例中，GSK-3抑制劑選自CHIR99021、CHIR98014、SB216763、BIO、A1070722、ARA014418以及它們的任何組合。在又一個或另一個實施例中，GSK-3抑制劑是CHIR99021。在又一個或另一個實施例中，GMP具有小、圓形和/或非附著的均一形態。