[發明專利]一種促進企劍白墨墨蘭組織培養過程中芽分化的方法

在審

• 申請號: 201910630104.3
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN110313401A
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 曾瑞珍;梁鈞淞;李潔鈮;郭和蓉;張志勝
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟;馬赟齋

本發明公開一種促進企劍白墨墨蘭組織培養過程中芽分化的方法，將企劍白墨墨蘭根狀莖接種于芽分化培養基中進行培養，所述芽分化培養基中含有細胞分裂素6?BA和催化生長素生物合成的類黃素單加氧酶專一性抑制劑Yucasin，促進了激素相關基因的表達并引起內源激素微環境的改變，從而促進企劍白墨墨蘭根狀莖芽分化，可直接用于企劍白墨墨蘭種苗的工廠化生產，推動墨蘭產業發展。

技術領域

本發明屬于植物組織培養，具體地涉及一種促進企劍白墨墨蘭組織培養過程中芽分化的方法。

背景技術

中國蘭，簡稱國蘭(Chinese Cymbidium)，是指蘭科蘭屬(Cymbidium)植物中的一部分地生種，包括春蘭、墨蘭、蕙蘭、建蘭、寒蘭、春劍、蓮瓣蘭、豆瓣蘭、送春等，具有極高的觀賞價值、經濟價值和文化價值。墨蘭是國蘭中最先被馴化、栽培最為廣泛的種類之一。其中，‘企劍白墨墨蘭’是墨蘭四大傳統品種之一，因其姿態秀美、芳香馥郁、花香幽遠，深受達官貴人、文人雅士喜愛，是中國蘭文化重要物質載體之一。隨著中國日益強大，作為中國傳統文化物質載體的國蘭將具有更廣闊的市場前景。

種苗工廠化繁殖是蘭花產業的核心技術之一，直接影響蘭花育種和種苗生產的效率。以大花蕙蘭為代表的附生蘭，中間繁殖體為類原球莖，易工廠化繁殖，早在上世紀60年代已形成‘蘭花工業’；以國蘭為代表的地生蘭，中間繁殖體為根狀莖，種苗工廠化繁殖難，導致目前國蘭種苗生產仍然以分株繁殖為主，嚴重制約了國蘭產業化發展。

蘭花種苗工廠化生產可分為中間繁殖體誘導、增殖、芽分化、生根壯苗和試管苗移栽5個步驟。國蘭組培快繁難的主要原因在于中間繁殖體根狀莖難分化。如企劍白墨墨蘭在組織培養過程中存在中間繁殖體根狀莖分化難的問題，導致其工廠化繁殖效率低，無法滿足商業化生產的要求。

發明內容

本發明的目的是為提高墨蘭組織培養過程中苗分化的效率而提供一種促進企劍白墨墨蘭組織培養過程中芽分化的方法。

一種促進企劍白墨墨蘭組織培養過程中芽分化的方法，將企劍白墨墨蘭根狀莖接種于芽分化培養基中進行培養，所述芽分化培養基中含有6-BA和Yucasin。

所述的芽分化培養基包括以下組分：MS培養基+0.1～1.0mg/L 6-BA+30～100μmol/L Yucasin+25g/L蔗糖+7.0g/L卡拉膠，pH為5.4～5.8。

所述芽分化培養基配制方法為：將MS培養基、6-BA、蔗糖和卡拉膠混合并調節pH至5.4～5.8，經高壓蒸汽滅菌，冷卻，再加入經過濾滅菌的Yucasin。Yucasin為生長素吲哚乙酸(IAA)的生物合成吲哚丙酮酸(IPA)途徑的關鍵酶——類黃素單加氧酶(YUCCA)專一抑制劑：5-(4-氯苯基)-2,4-二氫-[1,2,4]-三唑-3-硫酮，即5-(4Chlorophenyl)-2,4-dihydro-[1,2,4]-triazole-3-thione。

所述高壓蒸汽滅菌的溫度120～125℃，時間15～25min。

所述企劍白墨墨蘭根狀莖長度為1.0～1.5cm。

所述培養條件為：每天光照12～14小時，光照強度為1500～2000lux，培養溫度為25～27℃的條件下培養，培養10～30天。與現有技術相比，本發明具有以下效果：

(1)芽分化是企劍白墨墨蘭種苗工廠化繁殖的關鍵步驟，生長素和細胞分裂素在其中揮著關鍵作用。Yucasin是類黃素單加氧酶(YUCCA)專一性抑制劑，本發明在芽分化培養基中同時加入Yucasin和6-BA能顯著促進企劍白墨墨蘭根狀莖激素相關基因YUCCA7,8、LAX2、PIN3、ABCB7,9、IAA3,4,6,9、GH3.4,6、ARF13、CRR2和LOG1的表達。