[發明專利]一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法

在審

• 申請號: 201910629134.2
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN110302423A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 郭文弘;何擁軍;李巧美;劉蘇汶;郭文靜;夏偉;軒秀玲
• 申請（專利權）人: 杭州藍朗生物技術有限公司
• 主分類號: A61L27/24
• 分類號: A61L27/24;A61L27/50;A61L27/54;C12P21/06;C07K1/30
• 代理公司: 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340
• 代理人: 儲德江

1.一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：包括膠原蛋白原液提取、濃度配制、均質、除泡步驟。

2.根據權利要求1所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：所述膠原蛋白原液的提取步驟如下：

①牛跟腱解凍，去血水、表面異物和筋膜，用溶液進行一次預處理；

②步驟一處理的牛跟腱去脂肪膜，用溶液進行二次預處理；

③步驟二處理完的牛跟腱冷凍后切片，用溶液進行前處理；

④將前處理完的牛跟腱切片持續酶解，離心取上清制備膠原粗提液；

⑤調節膠原粗提液pH，加入中性鹽鹽析，離心獲得膠原蛋白沉淀；

⑥加入磷酸鹽緩沖液溶解上述沉淀，獲得膠原蛋白原液。

3.根據權利要求1所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：所述濃度配制的步驟如下：

稱取一定質量的膠原蛋白原液，調整濃度后獲得膠原蛋白溶液；

攪拌膠原蛋白溶液至無顆粒,并調節pH至4.0～7.0之間。

4.根據權利要求3所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：

所述膠原蛋白溶液的質量濃度為6～20mg/ml。

5.根據權利要求3所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：膠原蛋白溶液調整步驟如下：

在膠原蛋白原液中加入一定體積的酸，通過分散器分散2～10min；

再次加入一定體積的酸，通過分散器分散1～10min。

6.根據權利要求3所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：膠原蛋白溶液攪拌步驟如下：

通過攪拌機攪拌10～180min。

7.根據權利要求3所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：調節膠原蛋白溶液pH步驟中，采用2％～20％氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀或碳酸氫鈉中的一種或幾種。

8.根據權利要求5所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：所述酸為乙酸、檸檬酸、酒石酸或亞酒石酸。

9.根據權利要求1所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：均質步驟如下：

使用均質機、分散器或攪拌機使蛋白溶液均一。

10.根據權利要求1所述的一種基于膠原蛋白的軟骨再生載體的制備方法，其特征是：除泡步驟如下：

將均質后的膠原蛋白溶液分裝于離心杯中配平，1000～2500r/min離心5～35min。