[發(fā)明專(zhuān)利]一種發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910623712.1
• 申請(qǐng)日: 2019-07-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110441292A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁楠楠;鮑安平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京信息職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/76
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/76;G01N21/31;G01N1/34;G01N1/38
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

1.一種發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

制備若干不同濃度的實(shí)驗(yàn)樣品、陰性對(duì)照樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品；

在無(wú)菌條件下制備發(fā)光細(xì)菌菌液；

將所述發(fā)光細(xì)菌菌液加入到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，然后將96孔細(xì)胞培養(yǎng)板置于酶標(biāo)儀中，30min后測(cè)定初始光密度值和初始生物發(fā)光值；

向發(fā)光細(xì)菌菌液中加入實(shí)驗(yàn)樣品、陰性對(duì)照樣品和陽(yáng)性對(duì)照樣品，前1h每30min測(cè)一次光密度值和生物發(fā)光值，隨后每1h測(cè)一次，測(cè)試不低于24h，測(cè)試過(guò)程中每5～10min振動(dòng)一次96孔細(xì)胞培養(yǎng)板；

做出陰性對(duì)照樣品的光密度值和生物發(fā)光值隨時(shí)間變化曲線(xiàn)，分別獲得光密度突變時(shí)間和生物發(fā)光突變時(shí)間；

根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品的生物發(fā)光值計(jì)算急性發(fā)光抑制率，根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品在所述生物發(fā)光突變時(shí)間的生物發(fā)光值計(jì)算發(fā)光細(xì)菌的慢性發(fā)光抑制率，根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品在所述光密度突變時(shí)間的光密度值計(jì)算發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)抑制率。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，通過(guò)公式(1)計(jì)算所述急性發(fā)光抑制率：

R_a＝100(L_NC-L_t)/L_NC (1)

式(1)中R_a表示急性發(fā)光抑制率，L_NC表示30min時(shí)陰性對(duì)照樣品的平均生物發(fā)光值，L_t表示同一時(shí)刻實(shí)驗(yàn)樣品的平均生物發(fā)光值。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，通過(guò)公式(2)計(jì)算所述慢性發(fā)光抑制率：

R_c＝100(I_NC-I_t)/I_NC (2)

式(2)中R_c表示慢性發(fā)光抑制率，I_NC表示陰性對(duì)照樣品在生物發(fā)光突變時(shí)間的平均生物發(fā)光值，I_t表示同一時(shí)刻實(shí)驗(yàn)樣品的平均生物發(fā)光值。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，通過(guò)公式(3)計(jì)算所述生長(zhǎng)抑制率：

R_g＝100(OD_NC-OD_t)/(OD_NC-OD₀) (3)

式(3)中R_g表示生長(zhǎng)抑制率，OD_NC表示陰性對(duì)照樣品在光密度突變時(shí)間的平均光密度值，OD_t表示同一時(shí)刻實(shí)驗(yàn)樣品的平均光密度，OD₀表示陰性對(duì)照樣品對(duì)應(yīng)的發(fā)光細(xì)菌菌液的初始光密度值。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，所述實(shí)驗(yàn)樣品為水相實(shí)驗(yàn)樣品或有機(jī)相實(shí)驗(yàn)樣品，對(duì)應(yīng)的所述陰性對(duì)照樣品為水相陰性對(duì)照樣品或有機(jī)相陰性對(duì)照樣品。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，所述水相實(shí)驗(yàn)樣品的制備方法包括步驟：

將待檢沉積物與3％NaCl溶液混合，在搖床中20℃條件下振蕩12h，以濾膜過(guò)濾獲得水相浸提液母液，然后以3％NaCl溶液稀釋獲得不同濃度水相實(shí)驗(yàn)樣品；

以3％NaCl溶液為水相陰性對(duì)照樣品。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的發(fā)光細(xì)菌的生長(zhǎng)作用和急慢性毒性檢測(cè)方法，其特征在于，所述有機(jī)相實(shí)驗(yàn)樣品的制備方法包括步驟：

將待檢沉積物與按體積比1：1混合的丙酮和己烷混勻，在微波消解爐中115℃條件下處理20min，以濾膜過(guò)濾，濾液用氮吹儀蒸發(fā)干，殘?jiān)芙庥诙谆鶃嗧恐校玫接袡C(jī)相浸提液，將有機(jī)相浸提液溶解于3％NaCl溶液，獲得濃度為1％的有機(jī)相浸提液母液，以3％NaCl溶液稀釋獲得不同濃度有機(jī)相實(shí)驗(yàn)樣品；

以3％NaCl溶液為溶劑，配制體積濃度為1％的二甲基亞砜溶液為有機(jī)相陰性對(duì)照樣品。