[發明專利]一種miRNAs原料液的提取方法

在審

• 申請號: 201910607684.4
• 申請日: 2019-07-08
• 公開（公告）號: CN110283815A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 胡小云
• 申請（專利權）人: 江蘇核泰生態科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：S101：選取顏色都為黃色的金銀花，并保證金銀花的顏色均勻，然后使用分選機篩選出質量均勻的金銀花，然后使用電子秤稱取400g篩選出的金銀花，然后將稱取的400g金銀花均等的分成兩份，并將兩份金銀花分別標記為A、B；本發明通過科學合理的提取方法，可實現大規模工業化生產；并且使用金銀花作為提取的原材料，提取過程所涉及的物質無毒害，具有食用安全，環保保護的特點；提取過程使用的儀器都可循環利用，極大的降低植物提取miRNAs成本；同時該提取方法操作簡單，方便了工作人員使用。

技術領域

本發明涉及miRNAs原料液提取技術領域，具體為一種miRNAs原料液的提取方法。

背景技術

miRNAs是真核生物中廣泛存在的一種長約21到23個核苷酸的RNA分子，可調節其他基因的表達；miRNA來自一些從DNA轉錄而來，但無法進一步轉譯成蛋白質的RNA（屬于非編碼RNA）；miRNA通過與靶信使核糖核酸(mRNA)特異結合，從而抑制轉錄后基因表達，在調控基因表達、細胞周期、生物體發育時序等方面起重要作用；在動物中，一個微RNA通常可以調控數十個基因。

現有的植物miRNAs提取方法以柱提法、磁珠法、trizol法、異硫氰酸胍法和SDS-KAc法為主；現有提取技術存在四個問題：1、多為小量樣本提取；2、提取過程中涉及有毒、有害物質；3、提取成本高；4、提取難度大。

發明內容

本發明的目的在于提供一種miRNAs原料液的提取方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種miRNAs原料液的提取方法，所述方法包括：

S101：選取顏色都為黃色的金銀花，并保證金銀花的顏色均勻，然后使用分選機篩選出質量均勻的金銀花，然后使用電子秤稱取400g篩選出的金銀花，然后將稱取的400g金銀花均等的分成兩份，并將兩份金銀花分別標記為A、B；

S102：將A份金銀花與B份金銀花分別放入到兩個相同的金銀花清洗機內，使用金銀花清洗機去除A份金銀花與B份金銀花表面的雜質與殘留農藥，對A份金銀花與B份金銀花起到清洗、浸泡、殺菌消毒和固色的作用，然后將清洗后的A份金銀花與B份金銀花分別放在兩個相同的燒杯內，并將A份金銀花對應的燒杯標記為C，B份金銀花對應的燒杯標記為D；

S103：將C燒杯內的A份金銀花加入到中藥粉碎機內，通過中藥粉碎機將A份金銀花粉碎，并將A份金銀花的細胞壁擊破，同時將D燒杯內的B份金銀花放置在陰涼處以備后續使用；

S104：將中藥粉碎機粉碎后的A份金銀花倒入到反應釜內，并向反應釜內加入500ML的純凈水，然后將反應釜內部的溫度調節至30℃～120℃，通過反應釜震蕩攪拌5min-300min，使粉碎后的A份金銀花內部的miRNAs從細胞釋放出來，并進入到純凈水中，從而達到浸提的效果，從而制備出miRNAs初始原料液；

S105：然后將反應釜內部的miRNAs初始原料液倒出，并使其降溫至常溫狀態，然后使用粗過濾篩將miRNAs初始原料液中的雜質過濾出，然后使用細胞過濾篩將miRNAs初始原料液中的細碎雜質過濾出，從而得到最終的miRNAs原料液；

S106：使用定量RT-PCR方法對過濾后的miRNAs原料液進行檢測，如果檢測到miRNAs原料液中的miRNAs比重較小時，使用D燒杯內的B份金銀花重復S104、S105步驟，從新制備新的miRNAs原料液。

其中，所述分選機利用空氣懸浮原理選取出重量相近的金銀花。

其中，所述中藥粉碎機用于粉碎A份金銀花的時間為20s～600s，所述中藥粉碎機用于粉碎B份金銀花的時間為20s～600s。

其中，所述中藥粉碎機粉碎后的A份金銀花和B份金銀花粒徑為25～800目。