[發明專利]一種牙髓干細胞制備方法

有效

• 申請號: 201910606448.0
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110468098A
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 張彥茹;黃宇;唐雯
• 申請（專利權）人: 北京中瑞聯合生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 11210 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 劉艷艷<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種牙髓干細胞制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）牙髓的運輸，把牙髓干細胞的運輸箱交于供者，供者接收到運輸箱后，把運輸箱中的取樣瓶放至冷藏冰箱，醫用冰袋放至冷凍冰箱，供者乳牙自行脫落后，采取乳牙放入取樣瓶中，把取樣瓶及醫用冰袋放回運輸箱中，24小時內運回實驗室；

（2）牙髓干細胞的分離，把乳牙從取樣瓶取出，用生理鹽水清洗乳牙后，用鑷子夾住牙齒冠部，再用注射器吸取生理鹽水從牙根斷面向里吹打牙髓腔，沖洗松動牙髓；使用拔髓針從牙根斷處插入牙髓腔中，慢慢擰動，向外輕拉，取出牙髓，放至離心管中，用注射器重新吸取生理鹽水，沖洗牙髓腔一次，收集兩次沖洗牙髓腔的生理鹽水加入放置牙髓的離心管中，離心去除生理鹽水，收集牙髓；

（3）牙髓干細胞的擴增培養，取完全培養基，重懸牙髓沉淀，并轉移到12孔板中；用一個拔髓針固定牙髓，用另一個拔髓針上的倒鉤剝離牙髓，使牙髓形成細小碎片，釋放其中的細胞，然后放在37℃、5％ CO₂、飽和濕度條件下培養。

2.根據權利要求1所述的牙髓干細胞制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述取樣瓶內放置有運輸液，所述運輸液配方為每100ml含有:注射用葡萄糖鈣0.1ml、注射用人血白蛋白5ml、注射用右旋糖苷40葡萄糖注射液44.9ml，注射用三磷酸腺苷50ml，青霉素鈉2萬單位，硫酸鏈霉素2萬單位。

3.根據權利要求1所述的牙髓干細胞制備方法，其特征在于，步驟（3）中，使用拔髓針上的倒鉤把牙髓剝離為1-2mm³細小碎片。