[發明專利]一種表達豬塞內卡病毒VP2基因的重組桿狀病毒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201910603934.7
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110358741B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 徐高原;張華偉;孫芳;周明光;郝根喜;曾小燕;朱嫻靜
• 申請（專利權）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/866;C12N5/10;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種表達豬塞內卡病毒VP2基因的重組桿狀病毒及其制備方法與應用。本發明提供一種重組桿狀病毒，其包含一個或多個拷貝的豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因。本發明還提供豬塞內卡病毒亞單位疫苗，其包含采用所述重組桿狀病毒表達的豬塞內卡病毒VP2蛋白。本發明通過人工密碼子優化，實現了豬塞內卡病毒的VP2蛋白的高水平、高純度表達，最大程度地保留了VP2蛋白的免疫原性。本發明提供的豬塞內卡病毒亞單位疫苗具有優異的免疫原性和高度的安全性，對豬塞內卡病毒的感染發揮理想的免疫保護效果。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種表達A型豬塞內卡病毒 VP2基因的重組桿狀病毒及其制備方法與應用以及包含豬A型豬塞內卡病毒VP2蛋白的亞單位疫苗及其制備方法。

背景技術

A型豬塞內卡病毒(Senecavirus A,SVA)屬于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)Senecavirus病毒屬，為無囊膜的單股正鏈RNA病毒，病毒粒子呈典型的二十面體對稱。SVA病毒顆粒由四種結構蛋白組成，分別是VP1、VP2、VP3和VP4，其中VP1、VP2和VP3蛋白暴露在病毒顆粒表面，VP4蛋白包埋在病毒粒子內側。SVA可引起豬鼻鏡及蹄冠處出現水皰、潰爛創面從而導致跛足甚至死亡，被感染的仔豬(4日齡以內)死亡率達30％～70％。該病毒的感染和擴散對生豬養殖業具有非常不利的影響，因此，開發安全有效的SVA疫苗對于SVA 的防控至關重要。

申請號為201810003888.2的中國專利公開了利用塞內卡全病毒制備滅活疫苗的方法，然而，滅活疫苗在生產和應用過程中安全性較差，可能會出現滅活不充分而在動物體內返強的潛在危險。相比于滅活疫苗，亞單位疫苗具有更高的安全性，且具有良好的免疫原性。因此開發高效的SVA亞單位疫苗具有重要意義。

亞單位疫苗中作為抗原的病毒蛋白的自身免疫原性及其在表達制備過程中天然結構和免疫原性的保持是決定亞單位疫苗免疫效果的關鍵。VP2蛋白是誘導動物機體產生中和抗體的保護性抗原的主要成分。昆蟲-桿狀病毒表達系統是近年來常用的真核表達系統，具有以下優勢：①昆蟲桿狀病毒表達系統為外源目的蛋白的正確折疊、二硫鍵和寡聚物的形成提供良好的環境，使表達的目的蛋白具有完整的生物學功能；②可對目的蛋白進行翻譯后修飾，如磷酸化、糖基化、信號肽切除等，最大程度地還原了目的蛋白的天然狀態；③表達水平高，最高能使目的蛋白的表達量占細胞總蛋白的30％；④安全性高、人畜無害；⑤能夠容納大分子量的插入片段或同時表達多個外源基因。

亞單位疫苗的規模化制備需要大量地制備抗原蛋白，因此，實現高水平、高純度的蛋白表達是降低亞單位疫苗生產成本的首要關鍵問題。

發明內容

為解決現有技術中存在的技術問題，本發明的目的是提供一種表達A型豬塞內卡病毒VP2基因的重組桿狀病毒及其制備方法與應用以及包含A型豬塞內卡病毒VP2蛋白的亞單位疫苗及其制備方法。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

本發明提供一種重組桿狀病毒，其包含一個或多個拷貝的豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因。

本發明中，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

豬塞內卡病毒VP2蛋白的原始編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在保證序列和結構正確以及較高的免疫原性的同時，為實現豬塞內卡病毒VP2蛋白的高水平表達，本發明優選的VP2蛋白編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列為根據昆蟲-桿狀病毒表達系統的特點，通過特定的人工密碼子優化和篩選獲得。

為更好地保證VP2蛋白的高水平表達以及分泌性，同時便于純化，在所述豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因的5’端連接GP64信號肽序列，3’端連接His標簽肽序列。