[發明專利]一種表達豬塞內卡病毒VP2基因的重組桿狀病毒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201910603934.7
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110358741B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 徐高原;張華偉;孫芳;周明光;郝根喜;曾小燕;朱嫻靜
• 申請（專利權）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/866;C12N5/10;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

1.一種重組桿狀病毒，其特征在于，其包含一個或多個拷貝的豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述VP2蛋白的編碼基因的序列如SEQ ID NO.5所示。

2.根據權利要求1所述的重組桿狀病毒，其特征在于，所述豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因的5’端連接有GP64信號肽序列，3’端連接有His標簽肽序列。

3.根據權利要求2所述的重組桿狀病毒，其特征在于，所述重組桿狀病毒含有如SEQ IDNO.8所示的序列。

4.根據權利要求1～3任一項所述的重組桿狀病毒，其特征在于，所述豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因在P10啟動子的控制下轉錄。

5.一種重組桿狀病毒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因進行密碼子優化，獲得序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的編碼基因；

(2)在序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的編碼基因的5’端和3’端分別連接GP64信號肽和His標簽肽，得到如SEQ ID NO.8所示的序列，將如SEQ ID NO.8所示的序列與轉移載體連接，構建攜帶一個或多個拷貝的VP2蛋白編碼基因的重組轉移載體；

(3)將所述重組轉移載體轉入大腸桿菌DH10Bac，構建攜帶一個或多個拷貝的VP2蛋白編碼基因的重組桿粒；

(4)將所述重組桿粒導入昆蟲細胞，獲得重組桿狀病毒。

6.權利要求1～4任一項所述的重組桿狀病毒在制備豬塞內卡病毒的抗原、抗體或亞單位疫苗中的應用。

7.一種豬塞內卡病毒亞單位疫苗，其特征在于，其包含豬塞內卡病毒VP2蛋白，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述豬塞內卡病毒VP2蛋白為采用權利要求1～4任一項所述的重組桿狀病毒或采用權利要求5所述的制備方法制備得到的重組桿狀病毒表達得到。

8.一種豬塞內卡病毒亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，利用重組桿狀病毒表達豬塞內卡病毒VP2蛋白；所述重組桿狀病毒包含一個或多個拷貝的豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因；所述VP2蛋白的編碼基因為經密碼子優化得到，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因的5’端連接有GP64信號肽序列，3’端連接有His標簽肽序列；所述重組桿狀病毒含有如SEQ ID NO.8所示的序列。

10.根據權利要求8或9所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)構建攜帶所述豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因的重組桿狀病毒；

(2)將所述重組桿狀病毒導入昆蟲細胞，培養導入所述重組桿狀病毒的昆蟲細胞，表達豬塞內卡病毒VP2蛋白；

(3)分離和純化VP2蛋白；

(4)將經純化的VP2蛋白與佐劑混合，制備亞單位疫苗。

11.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于，所述構建攜帶所述豬塞內卡病毒VP2蛋白的編碼基因的重組桿狀病毒包括如下步驟：

(1)將VP2蛋白的編碼基因進行密碼子優化，獲得序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的編碼基因；

(2)在序列如SEQ ID NO.5所示的VP2蛋白的編碼基因的5’端和3’端分別連接GP64信號肽和His標簽肽，得到如SEQ ID NO.8所示的序列，將如SEQ ID NO.8所示的序列與轉移載體連接，構建攜帶一個或多個拷貝的VP2蛋白編碼基因的重組轉移載體；

(3)將所述重組轉移載體轉入大腸桿菌DH10Bac，構建攜帶一個或多個拷貝的VP2蛋白編碼基因的重組桿粒；

(4)將所述重組桿粒導入昆蟲細胞，獲得所述重組桿狀病毒。