[發明專利]一種基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法

有效

• 申請號: 201910602651.0
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110257366B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 王杰;張成省;劉明宏;王耀晨;趙棟霖;鄒平;袁源
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所（中國煙草總公司青州煙草研究所）;貴州省煙草公司遵義市公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;A01N63/22;A01P3/00;A01G13/00;C12R1/125
• 代理公司: 佛山粵進知識產權代理事務所(普通合伙) 44463
• 代理人: 張敏

本發明公開了一種基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法，包括以下步驟：生物炭制備，制備固化菌劑，生物炭盆栽防病實驗。在本發明的盆栽實驗中，添加最佳搭載生物炭菌劑的防治效果達79.55％，防治效果好，在煙草黑脛病的生物防治方面具有潛在的應用價值，發展和應用前景良好。

技術領域

本發明涉及一種煙草病害防治方法，尤其涉及一種基于生物炭的枯草芽孢桿菌在煙草病害防治中的應用。

背景技術

煙草是一種重要的經濟作物，煙草黑脛病是世界各煙草種植區的重要病害之一。目前對黑脛病的控制仍然以化學藥劑為主，從而導致病原菌抗藥性增強、環境污染及煙葉重金屬含量超標等后果，影響防治效果、生態安全和人類健康。

煙草屬于吸食性產品，隨著人們對環境與健康的日益重視，減少農藥使用，促進安全優質的煙葉生產，對改善農業生態環境具有重要意義。生物防治對環境友好，在某些情況下防治效果優于化學藥劑，特別是在病害發病高峰期常伴隨高溫多雨，化學藥劑難以發揮作用，因此，生物防菌劑的開發較為重要。

目前，枯草芽孢桿菌已經應用在煙草黑脛病防治中，但是單一的枯草芽孢桿菌的防治效果有待提高。

發明內容

本發明克服了現有技術的不足，提供一種防治效果較好的方法。

一種基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法，包括以下步驟：

S1生物炭制備：

取粉碎后的植物莖桿，在300℃-500℃條件下，反應5h，制備生物炭，粉碎研磨，過篩備用；

S2制備固化菌劑：

S201稱取S1中制備的生物炭1g，放在50ml離心管種，加入菌懸液20ml，振蕩吸附24h；

S202取出后，離心，棄上清液；

S203用0.85％的生理鹽水洗滌S202中的下層離心固體，然后離心5min，重復洗滌2次，再離心后獲得固定化菌劑；

S 3生物炭盆栽防病

S 301將酸化土與黑脛菌谷混合，添加S203中獲得的固定化菌劑，設置對照組；

S302盆栽試驗前，植盆栽試驗第0、10、15、20d，測定土壤理化性質，理化性質指標包括：全氮含量、碳氮比、堿解氮含量、速效磷含量、速效鉀含量、pH、電導率；

S303接種后每第0、10、15、20d，以株為單位，調查黑脛病發病情況，計算病情指數和相對防治效果，其中，

病情指數＝∑(各級病株數×該病級值)/(調查總株數×最高級值)×100

相對防治效果＝(對照病情指數—處理病情指數)/對照病情指數×100；

S 304盆栽后第0、10、15、20d，取煙苗根際土，采用實時熒光定量PCR技術檢測煙草黑脛病菌在煙草根際變化規律。

進一步包括，步驟S201中，振蕩吸附的方法是將錐形瓶置于搖床中，振蕩吸附的條件為：室溫，振蕩速度175r/min。

進一步包括，步驟S202中，離心條件為2500r/min離心10min。

進一步包括，步驟S 304中，根據NCBI數據庫中煙草黑脛病菌的18SrDNA基因序列設計熒光定量PCR特異引物SP：5'-TGAAGAACGCTGCGAACTGC-3'，AP：5’-CTGACATCTCCTCCACCGACTA-3'，擴增目的片段長度為172bp。

進一步包括，在步驟S1中，制備生物炭是，過60-100目篩。

本發明解決了背景技術中存在的缺陷，本發明具備以下有益效果：