[發明專利]一種基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法

有效

• 申請號: 201910602651.0
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110257366B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 王杰;張成省;劉明宏;王耀晨;趙棟霖;鄒平;袁源
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所（中國煙草總公司青州煙草研究所）;貴州省煙草公司遵義市公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;A01N63/22;A01P3/00;A01G13/00;C12R1/125
• 代理公司: 佛山粵進知識產權代理事務所(普通合伙) 44463
• 代理人: 張敏

1.一種基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1 生物炭制備：

取粉碎后的植物莖桿，在300℃-500℃條件下，反應5h，制備生物炭，粉碎研磨，過篩備用；

將制備的生物炭進行理化性質、灰分測定，選擇理化性質較好的生物炭條件如下：在300℃條件下，反應5h，制備生物炭，粉碎研磨，過60目篩備用；

S2 制備固化菌劑：

S201 稱取S1中制備的生物炭1g，放在50ml離心管種，加入枯草芽孢桿菌懸液20ml，振蕩吸附24h；

S202 取出后，離心，棄上清液；

S203 用0.85%的生理鹽水洗滌S202中的下層離心固體，然后離心5min，重復洗滌2次，再離心后獲得固定化菌劑；

選擇吸附性較好的固定化菌劑；

S 3 生物炭盆栽防病

S 301 將酸化土與黑脛菌谷混合，添加S203中獲得的固定化菌劑，設置對照組；

S302盆栽試驗前，植盆栽試驗第0、10、15和/20天，測定土壤理化性質，理化性質指標包括：全氮含量、碳氮比、堿解氮含量、速效磷含量、速效鉀含量、pH和/電導率；

S303接種后每第0、10、15和20 天，以株為單位，調查黑脛病發病情況，計算病情指數和相對防治效果，其中，

病情指數=∑(各級病株數×該病級值)/(調查總株數×最高級值)×100

相對防治效果=(對照病情指數—處理病情指數)/對照病情指數×100；

S 304 盆栽后第0、10、15和20天，取煙苗根際土，采用實時熒光定量PCR技術檢測煙草黑脛病菌在煙草根際變化規律。

2.根據權利要求1所述的基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法，其特征在于，步驟S201中，振蕩吸附的方法是將錐形瓶置于搖床中，振蕩吸附的條件為：室溫，振蕩速度175r/min。

3.根據權利要求1所述的基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法，其特征在于，步驟S202中，離心條件為2500r/min離心10min。

4.根據權利要求1所述的基于生物炭的枯草芽孢桿菌對煙草病害的防治方法，其特征在于，步驟S 304中，根據NCBI數據庫中煙草黑脛病菌的18SrDNA 基因序列設計熒光定量PCR特異引物SP：5'-TGAAGAACGCTGCGAACTGC-3'，AP：5’-CTGACATCTCCTCCACCGACTA-3'，擴增目的片段長度為172bp。