[發明專利]一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法

在審

• 申請號: 201910601859.0
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110511971A
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 陳可泉;王瑩瑩;楊賽;張阿磊;莫曉芳;周寧;許晟;曹飛;歐陽平凱
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26
• 代理公司: 32285 南京先科專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 葉帥東<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，微生物發酵產幾丁質酶，并獲得濃縮酶液

將Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1（ATCC BAA-2140^T） 菌株接種到種子液培養基中，37℃、200rpm 下培養 12 h，再以體積分數 5% 的接種量接入裝有產酶發酵培養基搖瓶中，在溫度為 26℃，轉速為 200rpm，初始 pH7.5 下發酵 72 h 后收集發酵液；將獲得的發酵液在4℃離心機中8000g離心，分離菌體，收集上清液，得到幾丁質粗酶液，將粗酶液在旋轉蒸發儀上抽真空濃縮，濃縮2-3h，得到原來0.3-0.6倍體積的濃縮酶液；

步驟2，超聲輔助幾丁質酶降解幾丁質

稱取0.005g-0.03g幾丁質，加入1-5ml純水和緩沖液，再加入100-500 μL濃縮酶液，震蕩均勻后在37℃，60%-100%功率的超聲波清洗機中在25-60℃下超聲0.5-3h；

步驟3，超聲處理結束后，將反應體系沸水煮5min，滅活，再向反應體系中加入1-5mlDNS，沸水煮5min，冷卻至室溫，觀察體系的顏色變化情況，并離心后取上清液，在波長540nm下測吸光度即得還原糖的含量。

2.根據權利要求1所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，所述的幾丁質酶液產于菌株Chitinolyticbacter meiyuanensis SYBC-H1的保藏編號為CGMCC 3438^T ，ATCC BAA-2140^T。

3.根據權利要求1所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，所述種子液培養基的組分為：2 g/L 葡萄糖，2 g/L 蛋白胨，0.7 g/LKH₂PO₄，0.3 g/L K₂HPO₄·3H₂O，0.4 g/LMgSO₄·7H₂O，pH 7.0。

4.根據權利要求1所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，產酶發酵培養基的組分為：3 g/L 粉粒幾丁質，3 g/L 菊粉，3 g/L 尿素，0.7 g/L KH₂PO₄，0.3 g/L K₂HPO₄·3H₂O ，0.5 g/L MgSO₄·7H₂O。

5.根據權利要求1所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步驟3反應體系中加有占其體積分數為0.1-0.2%的抗生素。

6.根據權利要求5所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，所述抗生素為卡納或四環素。

7.根據權利要求1所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步驟2中超聲時溫度為37℃。

8.根據權利要求1所述的一種超聲輔助酶法降解幾丁質生產N-乙酰氨基葡萄糖的方法，其特征在于，步驟3中純水和緩沖液的體積比1：1。