[發(fā)明專利]一種測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極的制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910595302.0
• 申請日: 2019-07-03
• 公開（公告）號: CN110231387A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙曉娟;楊春婷;張敏;白衛(wèi)東;曾曉房
• 申請（專利權(quán)）人: 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48
• 代理公司: 佛山幫專知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44387
• 代理人: 顏春艷

本發(fā)明涉及電分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極的制備方法及其應(yīng)用。所述的電化學(xué)生物傳感器工作電極的制備方法，包含如下步驟：(1)將粘土分散液均勻滴涂于玻碳電極表面，晾干后制得Clay/GCE；(2)將Clay/GCE置于變性Hb溶液中，于3～5℃冰箱靜置吸附0.5～1.5h，使變性Hb固定在電極表面，吸附完成后以超純水淋洗電極，晾干后得到uHb/Clay/GCE；(3)將GLU溶液均勻滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO?GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極。該電化學(xué)生物傳感器工作電極具有良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，且靈敏度高，適用于豬肉等樣品中腐胺的檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及電分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

腐胺，別名1,4-二氨基丁烷，普遍存在于含蛋白質(zhì)豐富的肉類等食品中，其含量是判斷食品受微生物污染水平的指標(biāo)之一，與食品的腐敗密切相關(guān)。當(dāng)腐胺的含量過高，就會對人體產(chǎn)生有害作用，如引起高血壓和頭痛。

目前食品中腐胺的檢測方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、毛細(xì)管電泳法以及傳感器法等。其中，生物傳感器工作電極由于靈敏度高、特異性強(qiáng)以及快速簡便等優(yōu)點(diǎn)在腐胺的快速檢測領(lǐng)域備受研究關(guān)注。因此，開發(fā)一種測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，為了克服現(xiàn)有技術(shù)中對用于腐胺測定的電化學(xué)生物傳感器工作電極的開發(fā)不足，提供一種測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極的制備方法。

本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題，通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

一種測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極的制備方法，包含如下步驟：

(1)將粘土分散液均勻滴涂于玻碳電極表面，晾干后制得Clay/GCE；

(2)將Clay/GCE置于變性Hb溶液中，于3～5℃冰箱靜置吸附0.5～1.5h，使變性Hb固定在電極表面，吸附完成后以超純水淋洗電極，晾干后得到uHb/Clay/GCE；

(3)將GLU溶液均勻滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO-GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的測定腐胺的電化學(xué)生物傳感器工作電極。

二胺氧化酶(DAO)屬于Ⅱ型銅蛋白，也稱為含吡哆醛的胺氧化酶，腐胺等二胺可在DAO的催化作用下脫去氨基生成氨、醛及過氧化氫，通過測定過氧化氫的生成量可確定待測樣品中生物胺的含量。DAO催化胺類物質(zhì)的原理如下：

血紅蛋白(Hb)是鐵蛋白中的一種，由2個α和2個β亞基組成，每個亞基都有一條肽鏈，每條肽鏈都有一個含鐵原子的環(huán)狀血紅素。血紅蛋白結(jié)構(gòu)很清晰，分布廣泛，是研究生物傳感器工作電極的理想模型。將血紅蛋白固定于電極上，可以用來檢測過氧化氫。其原理如下：

戊二醛(GLU)是一種常用的酶交聯(lián)劑，在常溫下，其醛基可與蛋白質(zhì)或酶的氨基發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，有利于提高電極的穩(wěn)定性。

本發(fā)明以GLU作為酶和蛋白的交聯(lián)劑，通過滴涂法和物理吸附法制備由Clay、uHb和DAO共同修飾的DAO-GLU/uHb/Clay/GCE；所述的DAO-GLU/uHb/Clay/GCE具有較高的穩(wěn)定性以及對腐胺具有響應(yīng)電流差值大以及較強(qiáng)的專一性等優(yōu)點(diǎn)；使得其在腐胺測定過程中具有良好的選擇性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性，且具有靈敏度高檢出限低等優(yōu)點(diǎn)。