[發明專利]一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201910595302.0
• 申請日: 2019-07-03
• 公開（公告）號: CN110231387A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 趙曉娟;楊春婷;張敏;白衛東;曾曉房
• 申請（專利權）人: 仲愷農業工程學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48
• 代理公司: 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387
• 代理人: 顏春艷

本發明涉及電分析化學技術領域，具體公開了一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法及其應用。所述的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，包含如下步驟：(1)將粘土分散液均勻滴涂于玻碳電極表面，晾干后制得Clay/GCE；(2)將Clay/GCE置于變性Hb溶液中，于3～5℃冰箱靜置吸附0.5～1.5h，使變性Hb固定在電極表面，吸附完成后以超純水淋洗電極，晾干后得到uHb/Clay/GCE；(3)將GLU溶液均勻滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO?GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極。該電化學生物傳感器工作電極具有良好的重現性和穩定性，且靈敏度高，適用于豬肉等樣品中腐胺的檢測。

技術領域

本發明涉及電分析化學技術領域，具體涉及一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法及其應用。

背景技術

腐胺，別名1,4-二氨基丁烷，普遍存在于含蛋白質豐富的肉類等食品中，其含量是判斷食品受微生物污染水平的指標之一，與食品的腐敗密切相關。當腐胺的含量過高，就會對人體產生有害作用，如引起高血壓和頭痛。

目前食品中腐胺的檢測方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、毛細管電泳法以及傳感器法等。其中，生物傳感器工作電極由于靈敏度高、特異性強以及快速簡便等優點在腐胺的快速檢測領域備受研究關注。因此，開發一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極具有重要的意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，為了克服現有技術中對用于腐胺測定的電化學生物傳感器工作電極的開發不足，提供一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法。

本發明所要解決的上述技術問題，通過以下技術方案予以實現：

一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，包含如下步驟：

(1)將粘土分散液均勻滴涂于玻碳電極表面，晾干后制得Clay/GCE；

(2)將Clay/GCE置于變性Hb溶液中，于3～5℃冰箱靜置吸附0.5～1.5h，使變性Hb固定在電極表面，吸附完成后以超純水淋洗電極，晾干后得到uHb/Clay/GCE；

(3)將GLU溶液均勻滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO-GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極。

二胺氧化酶(DAO)屬于Ⅱ型銅蛋白，也稱為含吡哆醛的胺氧化酶，腐胺等二胺可在DAO的催化作用下脫去氨基生成氨、醛及過氧化氫，通過測定過氧化氫的生成量可確定待測樣品中生物胺的含量。DAO催化胺類物質的原理如下：

血紅蛋白(Hb)是鐵蛋白中的一種，由2個α和2個β亞基組成，每個亞基都有一條肽鏈，每條肽鏈都有一個含鐵原子的環狀血紅素。血紅蛋白結構很清晰，分布廣泛，是研究生物傳感器工作電極的理想模型。將血紅蛋白固定于電極上，可以用來檢測過氧化氫。其原理如下：

戊二醛(GLU)是一種常用的酶交聯劑，在常溫下，其醛基可與蛋白質或酶的氨基發生交聯反應，有利于提高電極的穩定性。

本發明以GLU作為酶和蛋白的交聯劑，通過滴涂法和物理吸附法制備由Clay、uHb和DAO共同修飾的DAO-GLU/uHb/Clay/GCE；所述的DAO-GLU/uHb/Clay/GCE具有較高的穩定性以及對腐胺具有響應電流差值大以及較強的專一性等優點；使得其在腐胺測定過程中具有良好的選擇性、重現性和穩定性，且具有靈敏度高檢出限低等優點。