[發明專利]一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201910595302.0
• 申請日: 2019-07-03
• 公開（公告）號: CN110231387A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 趙曉娟;楊春婷;張敏;白衛東;曾曉房
• 申請（專利權）人: 仲愷農業工程學院
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48
• 代理公司: 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387
• 代理人: 顏春艷

1.一種測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，包含如下步驟：

(1)將粘土分散液均勻滴涂于玻碳電極表面，晾干后制得Clay/GCE；

(2)將Clay/GCE置于變性Hb溶液中，于3～5℃冰箱靜置吸附0.5～1.5h，使變性Hb固定在電極表面，吸附完成后以超純水淋洗電極，晾干后得到uHb/Clay/GCE；

(3)將GLU溶液均勻滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO-GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極。

2.根據權利要求1所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的粘土分散液的用量為5μL；所述的粘土分散液的濃度為1mg/mL。

3.根據權利要求2所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，所述的粘土分散液通過如下方法制備得到：準確稱取粘土溶于超純水中，超聲分散均勻后于4℃冰箱過夜膨脹得1mg/mL的粘土分散液。

4.根據權利要求1所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的變性Hb(uHb)溶液通過如下方法制備得到：準確稱取一定質量的尿素，溶于PBS溶液中，配制成濃度為3mol/L的尿素溶液，接著稱取Hb溶于3mol/L尿素溶液配制濃度為63μmol/L的變性Hb溶液；再將配制好的變性Hb溶液在3～5℃冰箱中儲存20～24h以達到變性平衡。

5.根據權利要求4所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，所述的PBS溶液是pH為2.0，濃度為0.1mol/L的PBS溶液。

6.根據權利要求1所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，步驟(2)中將2μL GLU溶液均勻滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂5μLDAO溶液，晾干后得到DAO-GLU/uHb/Clay/GCE。

7.根據權利要求6所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，所述的GLU溶液為質量分數為2.5％的GLU水溶液。

8.根據權利要求6所述的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極的制備方法，其特征在于，所述的DAO溶液通過如下方法制備得到：準確稱取DAO溶于pH值為7.0、濃度為0.1mol/L的PBS溶液中，配制成濃度為90mg/mL的DAO溶液。

9.權利要求1～8任一項所述制備方法制備得到的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極在測定食品中腐胺的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，具體包含如下步驟：

電化學工作站連接步驟：工作電極選用權利要求1～8任一項所述制備方法制備得到的測定腐胺的電化學生物傳感器工作電極、參比電極選用Ag/AgCl(飽和KCl溶液)電極，輔助電極選用鉑絲電極，將三電極體系連接至電化學工作站；

樣品前處理步驟：將待測樣品進行前處理制備得到待測樣品溶液；

含量測定步驟：采用方波伏安法測定待測樣品溶液的還原峰電流差值，根據線性方程換算出待測樣品溶液中腐胺的濃度，進而得出樣品中腐胺的含量；

在1.0×10^-11～1.0×10^-10mol/L時，線性方程為：ΔI＝3.9475C+1.6957(r＝0.997,n＝5)；在1.0×10^-10～1.0×10^-9mol/L時，線性方程為：ΔI＝0.2956C+2.1278(r＝0.998,n＝4)；方程中C為腐胺的濃度，單位為nmol/L；ΔI＝I_腐胺－I_PBS為還原峰電流差值，單位為μA；

所述的方波伏安法的檢測條件為：電位窗口為(0.2V)～(-0.8V)，電位增量4mV/s，方波振幅25mV，方波頻率15Hz。