[發明專利]臨床級細胞冷藏保存液及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910591905.3
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN112167240A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發明（設計）人: 徐念沁;徐珂;姜強;王燁
• 申請（專利權）人: 南京三生生物技術股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 高姍

本發明涉及細胞冷藏保存技術領域，尤其是一種臨床級細胞冷藏保存液及其制備方法和應用，該細胞冷藏保存液以注射用水為溶劑，每1000mL細胞冷藏保存液中包括如下物質：葡萄糖酸鈉10g～60g，檸檬酸鈉1g～20g，海藻糖1g～20g，右旋糖酐10g～150g，甘露醇0.1g～15g，葡萄糖0.1g～15g，腺嘌呤0.1g～15g，谷胱甘肽0.1g～15g，磷酸氫二鉀0.1g～30g，氯化鎂0.1g～15g，氯化鉀0.1g～15g，氯化鈉0.1g～15g，維生素E 0.01g～2g。該臨床級細胞冷藏保存液不含血清、蛋白、二甲基亞砜(DMSO)等傳統細胞保存劑成份，成份構成穩定，比例明確，安全無害，可直接用于靜脈回輸或皮下注射。能在不凍結的冷藏狀態下(2～8℃)，有效保持細胞活率的保存液。

技術領域

本發明涉及細胞冷藏保存領域，具體領域為一種臨床級細胞冷藏保存液及其制備方法。

背景技術

近年來利用細胞治療疾病的研究成為熱點。干細胞是具有多向分化潛能的原始細胞，可形成人體各種組織器官。干細胞技術是生物治療的前沿技術。腫瘤的免疫治療因其對于常規療法無效的晚期腫瘤具有顯著療效而受到極大關注，免疫細胞治療癌癥是一種高效、先進的治療方法，已在白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤的治療中展現出驚人的效果。

細胞治療涉及細胞采集、培養擴增、基因修飾、細胞回輸/移植治療這幾個過程。通常，這些過程的實施地點或者時間并不一致，治療用細胞會在不同地點、不同時間點之間運輸。多數治療機構僅僅在細胞回輸/治療前對送達的細胞產品進行質控，容易忽視整個運輸過程中的細胞質控和管理，即從細胞采集到最終治療，在常溫或37℃環境中，細胞內生化反應活躍、代謝旺盛、耗氧高、能耗大。這些生理過程會產生的大量氧自由基和脂質過氧化物，它們必須及時被清除，否則會引起環境pH和滲透壓變化，造成細胞溶脹和死亡。在細胞運輸中，這一問題更為突出，因此通常將細胞冷凍后用液氮或干冰進行轉運。在冷凍狀態下，細胞停止生命活動和新陳代謝，進入“休眠”。送達的細胞經復溫后“蘇醒”，復溫操作者必須謹慎，避免從“休眠”至“蘇醒”過程中的操作對細胞造成不可逆的損傷。冷凍運輸對運輸條件要求非常苛刻，并且運輸成本高昂。因此，雖然冷凍運輸是較完美的運輸解決方案，細胞活性能長期得到保存，實際應用中卻難以廣泛采用。所有保存和運輸環節都應當執行標準化操作和管理。

除了通過冷凍停止細胞代謝，還可以通過降低代謝達到短期保存和運輸細胞的目的，即——低溫保存和運輸。低溫(2～8℃)處理可降低細胞正常生理過程中產生的氧自由基和脂質過氧化物，送達的細胞無需特別處理，可直接使用。此外，低溫運輸與冷凍運輸相比，非常廉價。

低溫運輸需要特別的保存液。普通緩沖鹽溶液無法長期維持細胞活性。臨床治療用的細胞不能接觸動物源成分，如血清和成分來源不明的蛋白和氨基酸。如果使用細胞培養基，安全性與穩定性堪憂。因此，為保障細胞的低溫保存和運輸，研制一種能夠安全、穩定、高效保存細胞活性的溶液非常重要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種臨床級細胞冷藏保存液及其制備方法和應用，以解決市場缺乏可在短期非凍結條件下保存細胞的手段的問題。該臨床級細胞冷藏保存液不含血清、蛋白、二甲基亞砜(DMSO)等傳統細胞保存劑成份，成份構成穩定，比例明確，安全無害，可直接用于靜脈回輸或皮下注射。能在不凍結的冷藏狀態下(2～8℃)，有效保持細胞活率的保存液。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種臨床級細胞冷藏保存液，以注射用水為溶劑，每1000mL細胞冷藏保存液中包括如下物質：葡萄糖酸鈉10g～60g，檸檬酸鈉1g～20g，海藻糖1g～20g，右旋糖酐10g～150g，甘露醇0.1g～15g，葡萄糖0.1g～15g，腺嘌呤0.1g～15g，谷胱甘肽0.1g～15g，磷酸氫二鉀0.1g～30g，氯化鎂0.1g～15g，氯化鉀0.1g～15g，氯化鈉0.1g～15g，維生素E0.01g～2g。

其中，pH值為6.0～8.0；滲透壓為250～500mOsm/L。所用原料均為藥用級。