[發明專利]雙特異性嵌合抗原受體T細胞，其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910588127.2
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN110330567B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 代紅久;李艷云
• 申請（專利權）人: 南京凱地生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/113;C12N7/01;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02;A61P31/00;A61P37/02;A61P29/00;A61P37/06;A61P39/06
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 王斌

本發明涉及一種雙特異性嵌合抗原受體T細胞，其制備方法和應用。本發明基于人NKG2D和人SIRPα分子構建的雙特異性靶向人NKG2DL和人CD47的雙特異性嵌合抗原受體以及其修飾的免疫應答細胞，該新型的修飾的免疫應答細胞能有效地靶向攻擊多種腫瘤細胞，尤其是表達NKG2DL和CD47的陽性腫瘤細胞，可用來制備用于治療腫瘤的制劑。本發明的雙特異性靶向NKG2DL和CD47的雙特異性嵌合抗原受體修飾的免疫應答細胞制備方法步驟簡單，獲得的雙特異性靶向NKG2DL和CD47的雙特異性嵌合抗原受體修飾的免疫應答細胞對腫瘤細胞的特異性殺傷率高。

技術領域

本發明屬于腫瘤免疫治療生物醫藥技術領域，涉及特異性嵌合抗原受體T細胞，具體地，涉及一種雙特異性靶向人NKG2DL和人CD47的、包含人NKG2D和人SIRPα蛋白或其功能性變體的雙特異性嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor,CAR)，其修飾的免疫應答細胞，及其制備方法和應用。

背景技術

隨著生物技術的飛速發展，免疫細胞治療已成為癌癥治療領域的第四大療法。

癌癥免疫療法主要包括過繼性細胞治療、免疫調節劑、腫瘤疫苗以及免疫檢驗點阻斷治療等。其中，在細胞治療領域，嵌合抗原受體修飾的免疫細胞(特別是ChimericAntigen Receptor T-Cell,CAR-T)療法無疑已成為研究機構和制藥公司爭相“追捧”的明星。

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-Cell，嵌合抗原受體修飾的T細胞)為代表的免疫療法，其原理主要是通過基因工程手段對病人自身提取的T細胞進行嵌合抗原受體的修飾形成CAR-T細胞，該T細胞能特異性地識別腫瘤表面相關抗原(腫瘤細胞標志物)，從而靶向殺傷腫瘤。相對于常規免疫細胞，CAR-T細胞的靶向性、殺傷活性和持久性都更高，并且可以克服腫瘤局部免疫抑制微環境并打破宿主免疫耐受狀態。該以CAR-T細胞為代表的修飾免疫細胞療法在白血病、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤的治療上有著顯著的療效，被認為是最有前景的腫瘤治療方式之一。

然而，90％的癌癥是實體瘤，更多種類的實體瘤以及更多的腫瘤表面特異性靶點抗原有待進一步確認。CAR-T免疫療法應用于實體瘤治療的最大難點在于CAR-T細胞對于腫瘤細胞上抗原表達的特異性要求非常高，容易造成T細胞持續激活而殺傷正常細胞，或釋放大量細胞因子引起嚴重毒副作用，但腫瘤特異的靶向抗原可選擇性并不多，并且，腫瘤表達的大多數抗原不具備腫瘤特異，以腫瘤相關抗原作為靶點的CAR-T免疫療法存在“脫靶”等問題。研究更廣譜、高效、安全的CAR-T免疫治療方法是時急需解決的問題。

發揮嵌合抗原受體修飾的免疫應答細胞技術應用的關鍵在于確定至少一種腫瘤相關的抗原，這種抗原在腫瘤細胞表面高表達，而在正常細胞表面無表達或低表達。近年來，NKG2DL蛋白和CD47蛋白成為備受關注的兩個實體瘤標志性靶標。

NKG2DL蛋白的表達是細胞處于“應激狀態”的一個指標，通常在不同來源的各種腫瘤細胞表面有較高水平的表達，NKG2D-NKG2DL系統在機體的抗腫瘤免疫中發揮著重要作用，NKG2D通過識別腫瘤細胞表面產生的NKG2DL來傳遞活化信號并激活免疫系統，從而對腫瘤細胞發揮殺傷作用。NKG2DL的表達作為機體發生腫瘤時腫瘤細胞上的一個特異性的改變，激活NKG2DL蛋白-NKG2D配體系統為腫瘤的免疫治療提供了一個更為精確的靶點，為相關新療法和藥物的開發提供了啟示。

此外人體有兩個不同的免疫系統，一個是以T細胞為代表的獲得性免疫系統，另一個是以巨噬細胞為代表的先天性免疫系統。巨噬細胞在細胞吞噬、抗原呈遞、免疫應答、維持細胞穩態、病原體防御以及抗腫瘤免疫調節等方面發揮重要功能。然而腫瘤相關巨噬細胞與腫瘤的關系似乎比較復雜：腫瘤組織之外的巨噬細胞可以直接殺傷腫瘤細胞；腫瘤組織中的巨噬細胞可分泌生長因子滋養腫瘤細胞，促進腫瘤的血管生成，導致腫瘤侵襲轉移，而在腫瘤組織內部的巨噬細胞越多對腫瘤殺傷效果越差。