[發明專利]一種甘薯潛隱病毒蓮藕分離物RT-RPA檢測試劑盒與檢測方法

在審

• 申請號: 201910584680.9
• 申請日: 2019-07-01
• 公開（公告）號: CN110283942A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 賀振;董婷婷;吳偉文;陳雯;李良俊
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 薛海霞;董建林

1.一種甘薯潛隱病毒蓮藕分離物RT-RPA檢測試劑盒，其特征在于，包括2條針對SPLV-lotus CP基因設計的特異性引物：

SPLV-lotusRPA-F：5’-GTCAACCATCCGCAACACCACCACAGTCAA-3’；

SPLV-lotusRPA-R：5’-TCTTTGTGGGTATTGCACGCAGCCGAGGTA-3’。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Prime Script?Reverse Transcriptase反轉錄酶、Oligo (dT)₁₅ Primer、Ribonuclease Inhibitor抑制酶、dNTP、DNA Marker、pMD18-T載體、RNA提取試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒、TwistAmp? DNAamplification kits、Mg²⁺。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

4.一種甘薯潛隱病毒蓮藕分離物SPLV-lotus的RT-RPA檢測方法，其包括以下步驟：

（1）采用多糖多酚植物組織的裂解法提取待測樣品總RNA；

（2）構建陽性質粒標準品；

（3）設計并篩選引物；引物包括

SPLV-lotusRPA-F：5’-GTCAACCATCCGCAACACCACCACAGTCAA-3’；

SPLV-lotusRPA-R：5’-TCTTTGTGGGTATTGCACGCAGCCGAGGTA-3’；

（4）采用RT-RPA反應體系進行重組酶聚合酶擴增。

5.根據權利要求4所述的一種甘薯潛隱病毒蓮藕分離物SPLV-lotus重組酶聚合酶擴增的檢測方法，其特征在于，步驟（4）的RT-RPA反應體系中，反應溫度為40℃。

6.根據權利要求4所述的一種甘薯潛隱病毒蓮藕分離物SPLV-lotus重組酶聚合酶擴增的檢測方法，其特征在于，步驟（4）的RT-RPA反應體系中，反應時間為30 min。

7.權利要求1-3任意一項所述的甘薯潛隱病毒蓮藕分離物RT-RPA檢測試劑盒在蓮藕脫毒苗檢測中的應用。