[發明專利]對稻飛虱不同組織中共生菌Cardinium的分布進行定位的方法

有效

• 申請號: 201910582506.0
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110241179B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 洪曉月;李同浦;周迎春;查思思
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12Q1/689;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 競存;徐冬濤

本發明公開了對稻飛虱不同組織中共生菌Cardinium的分布進行定位的方法，屬于農業生物技術范疇。本發明首先解剖并分離出稻飛虱的不同組織；然后根據Cardinium的16S?rRNA序列設計出三段具有熒光標記的特異性的寡核苷酸探針；最后利用特異性探針對稻飛虱中存在的Cardinium進行雜交，通過激光共聚焦顯微鏡的掃描即可快速對稻飛虱組織中的Cardinium進行準確的定位。本發明所述的定位方法具有高度的特異性、敏感性、可行性和有效性，同時可節約成本。本發明有利于更好地研究Cardinium和宿主之間的相互作用關系，也有助于研究壓制害蟲種群的策略以及抵抗病毒傳播的機制。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及對稻飛虱不同組織中共生菌 Cardinium的分布進行定位的方法。

背景技術

Cardinium是一類位于細胞內的可以進行母系傳播的革蘭氏陰性內共生細菌。它們廣泛存在于許多節肢動物中，一些重要的農業害蟲如稻飛虱、葉螨、煙粉虱和寄生蜂中均發現 Cardinium的存在。它們可以對宿主的生殖和發育進行調控，包括胞質不親和性（Cytoplasmic?incompatibility，CI）、孤雌生殖（parthenogenesis?inducing）、雌性化（Feminization）和殺雄（Male-killing）。其中，由 Cardinium誘導的最重要的生殖表型是CI。CI的發生與共生菌的侵染有關，當未感染的雌蟲與感染的雄蟲交配時所產生的后代不能夠正常孵化。這些表型的發生主要得益于 Cardinium在昆蟲各種組織中的廣泛分布。

Wolbachia是另一種內共生菌，也廣泛存在于節肢動物中，并且一些 Wolbachia株系已經被轉染到蚊子和果蠅中。人們通過對宿主中的 Wolbachia進行定位，了解了它們在宿主組織中的分布范圍，確定了它們具有的100%的垂直傳播率，從而有利于更好地研究壓制害蟲種群的策略以及抵抗病毒傳播的機制。然而， Cardinium在一些重要害蟲組織中的分布卻沒有很好地被描述。

白背飛虱 Sogatella?furcifera（Horváth）和褐飛虱 Nilaparvata?lugens（St?l）是兩種可以長距離遷飛性的害蟲，對亞洲農耕區的水稻造成嚴重危害。白背飛虱可以自然感染 Cardinium并誘導宿主強烈的CI；褐飛虱雖然自然狀態下不感染 Cardinium，通過人工轉染的方法也可以穩定感染 Cardinium。

然而，兩種稻飛虱中 Cardinium在組織中的分布還沒有被準確的定位。因此，我們急需一種方法對稻飛虱中分布的 Cardinium進行定位，從而有利于更好地研究共生菌和昆蟲之間的相互作用關系。

發明內容