[發明專利]一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910579052.1
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110346569A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 余旭亮
• 申請（專利權）人: 安徽恩禾生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 馮慧云

本發明涉及胸苷激酶檢測技術領域，具體是公開了一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，所述試劑盒采用雙抗體夾心法人血清中TK1的含量，所述試劑盒包括公共液體、包被載體和工作液；所述公共液體包括化學發光底物、終止液和濃縮洗滌液，所述載體采用微孔板，所述工作液包括酶結合物、結合抗體、質檢品和校準品。本發明克服了現有技術的不足，采用化學發光法進行檢測，將檢測周期控制在50min，操作簡單方便，靈敏度大大提高，試驗盒的實驗結果穩定，重復性高。

技術領域

本發明涉及胸苷激酶檢測技術領域，具體屬于一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

胸苷激酶(TK1)是一種激酶，參與DNA的合成。胸苷激酶(TK1)被認為是一種較有參考價值的新腫瘤標記物,且其升高或降低與腫瘤的發生、發展、轉移有密切關系。TK1酶活性與其對應蛋白量都在S期早期迅速升高和積累，并在進行有絲分裂細胞中達到最高。

現有的檢測方法，檢出率低，特異性不好，容易存在假陽性，假陰性的問題，對患者的病情的評判受到很大程度的影響。因此，必須通過適當的檢測分析方法改善傳統檢測方法中存在的不足，以達到準確檢測的目的。

發明內容

本發明的目的是提供了一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，解決現有檢測方法檢測時間長，靈敏度不高，重復性差的問題，對雜質的控制不嚴格，不能保證檢測結果準確性的問題。

為解決上述問題，本發明所采取的技術方案如下：

一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，所述試劑盒采用雙抗體夾心法人血清中TK1的含量，所述試劑盒包括公共液體、包被載體和工作液；所述公共液體包括化學發光底物、終止液和濃縮洗滌液，所述載體采用微孔板，所述工作液包括酶結合物、結合抗體、質檢品和校準品。

進一步，所述酶結合物采用辣根過氧化物酶作為標記酶，所述化學發光底物采用DAB顯色液，所述DAB顯色液包括顯色液A和顯色液B。

一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

(1)制備包被載體；抗TK1抗體用包被緩沖液稀釋，取待包被微孔板，將經過稀釋的抗TK1抗體負載于微孔板上，包被結束后，吸去包被緩沖液，再加入封閉液，置于37℃封閉3小時或在室溫下封閉過夜；棄去封閉液，干燥包被載體后加入干燥劑密封包裝，得到抗TK1抗體包被載體。

(2)制備公共液體：

A、制備終止液：終止液為pH7.2、6mmol/L的蘇木精染色液；

B、制備DAB顯色液；顯色液A為pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，顯色液B為pH6.0、10mmol/L的過氧化氫溶液；

C、制備濃縮洗滌液；濃縮洗滌液為pH7.2-7.4、20mmol/L PBS緩沖液；

(3)制備標準品和質控品；用稀釋液與人體血清按體積比3∶1比例混合配制成基礎緩沖液，用基礎緩沖液將抗TK1抗體稀釋成濃度為100、 80、60、40、20、0ng/mL標準品；用基礎緩沖液將抗TK1抗體稀釋成濃度為100ng/mL高值質控品和50ng/mL低值質控品。

(4)組裝試劑盒；將標準品和質控品、包被載體、公共液體經過半成品分裝經過半成品質檢后組裝成胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒。

進一步，步驟1中包被緩沖液為pH7.2、10mmol/L的磷酸鹽溶液，所述封閉液為pH7.4、20mmol/L的PBST溶液，內含1％BSA、0.1％Proclin300 以及3％蔗糖。

進一步，所述步驟2中顯色劑A和顯色劑B按照1:1的比例混合使用，現用現配。

進一步，所述步驟3中稀釋液為pH7.4、20mmol/L PBS溶液。