[發明專利]一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910579052.1
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110346569A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 余旭亮
• 申請（專利權）人: 安徽恩禾生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 合肥律眾知識產權代理有限公司 34147
• 代理人: 馮慧云

1.一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒采用雙抗體夾心法人血清中TK1的含量，所述試劑盒包括公共液體、包被載體和工作液；所述公共液體包括化學發光底物、終止液和濃縮洗滌液，所述載體采用微孔板，所述工作液包括酶結合物、結合抗體、質檢品和校準品。

2.根據權利要求1所述的一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：所述酶結合物采用辣根過氧化物酶作為標記酶，所述化學發光底物采用DAB顯色液，所述DAB顯色液包括顯色液A和顯色液B。

3.一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)制備包被載體；抗TK1抗體用包被緩沖液稀釋，取待包被微孔板，將經過稀釋的抗TK1抗體負載于微孔板上，包被結束后，吸去包被緩沖液，再加入封閉液，置于37℃封閉3小時或在室溫下封閉過夜；棄去封閉液，干燥包被載體后加入干燥劑密封包裝，得到抗TK1抗體包被載體。

(2)制備公共液體：

A、制備終止液：終止液為pH7.2、6mmol/L的蘇木精染色液；

B、制備DAB顯色液；顯色液A為pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，顯色液B為pH6.0、10mmol/L的過氧化氫溶液；

C、制備濃縮洗滌液；濃縮洗滌液為pH7.2-7.4、20mmol/L PBS緩沖液；

(3)制備標準品和質控品；用稀釋液與人體血清按體積比3∶1比例混合配制成基礎緩沖液，用基礎緩沖液將抗TK1抗體稀釋成濃度為100、80、60、40、20、0ng/mL標準品；用基礎緩沖液將抗TK1抗體稀釋成濃度為100ng/mL高值質控品和50ng/mL低值質控品。

(4)組裝試劑盒；將標準品和質控品、包被載體、公共液體經過半成品分裝經過半成品質檢后組裝成胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒。

4.根據權利要求3所述的一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：步驟1中包被緩沖液為pH7.2、10mmol/L的磷酸鹽溶液，所述封閉液為pH7.4、20mmol/L的PBST溶液，內含1％BSA、0.1％Proclin300以及3％蔗糖。

5.根據權利要求3所述的一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：所述步驟2中顯色劑A和顯色劑B按照1:1的比例混合使用，現用現配。

6.根據權利要求3所述的一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：所述步驟3中稀釋液為pH7.4、20mmol/L PBS溶液。

7.根據權利要求3所述的一種胸苷激酶化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：所述步驟4中采用滴配實驗的方式進行半成品檢測，檢測合格的產品再進行組裝。

8.一種利用權利要求1所述的試劑盒檢測胸苷激酶含量的檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

1)加入待測樣品，100μL/孔，37℃孵育60min；

2)加酶：每孔加入兩滴或100ul的酶標記物；

3)溫育：用封口膜將條板封好(防止污染),37℃溫育60分鐘；

4)洗板：取出反應板，甩盡板中液體，洗板5次，拍干，在洗滌過程中應避免產生氣泡；

5)每孔加入顯色劑A、B溶液各一滴或各50ul，充分混勻；

6)測定：用半自動發光儀，測定各孔OD.值；

7)結果計算：以校準品濃度作橫坐標，OD.值作縱坐標。通過標本的OD.值可在標準曲線上查出其濃度。