[發明專利]檢測HTT基因CAG三核苷酸重復序列的方法及引物對

在審

• 申請號: 201910577589.4
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110184344A
• 公開（公告）日: 2019-08-30
• 發明（設計）人: 馮薇;翟瑞雪;智慧芳;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 濟南信達專利事務所有限公司 37100
• 代理人: 李世喆

1.檢測HTT基因CAG三核苷酸重復序列的方法，其特征在于，包括：

合成引物對，所述引物對的正向引物的5’端和反向引物的5’端中的至少一端由熒光基團標記；

從待測樣本中提取基因組DNA，作為DNA模板；

配置包含所述引物對和所述擴增模板的PCR擴增體系；

對所述PCR擴增體系進行擴增反應，獲得含有CAG三核苷酸重復序列的PCR產物；

毛細管電泳檢測所述PCR產物，并根據電泳檢測結果計算所述待測樣本的HTT基因CAG三核苷酸重復數。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述引物對的正向引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.1所示且反向引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.2所示；

和/或，

所述熒光基團包括FAM、HEX、TAMARA、ROX中的任意一種。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述PCR擴增體系包括：蒸餾水8～14μL，2×PCR buffer20～30μL，2.0mM dNTP8～12μL，0.1～2μmol的所述正向引物0.5～3μL，0.1～2μmol的所述反向引物0.5～3μL，0.5～2U/μL的DNA聚合酶0.5-2μL，所述DNA模板5～500ng。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述擴增反應的反應條件為：90～98℃0.5～10min；90～95℃0.17～1min，50～70℃0.17～1min，68～72℃0.5～10min，共25～45個循環；68～72℃0～10min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述毛細管電泳檢測所述PCR產物，并根據電泳檢測結果計算所述待測樣本的HTT基因CAG三核苷酸重復數，包括：

利用毛細管電泳測序儀檢測所述PCR產物；

利用毛細管電泳分析軟件對電泳檢測結果進行數據分析，以確定所述PCR產物的片段大小；

利用公式一計算所述待測樣本的HTT基因CAG三核苷酸重復數；

其中，所述公式一包括：N＝(L-83)/3；

其中，N為所述待測樣本的HTT基因CAG三核苷酸重復數；L為所述PCR產物的片段大小，單位為bp；83為引物長度與5’和3’端側翼堿基數之和，單位為bp；3為CAG三核苷酸的重復單位堿基數，單位為bp。

6.根據權利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于，

所述待測樣本包括血液、血清、血漿、口腔拭子、組織中的任意一種。

7.檢測HTT基因CAG三核苷酸重復序列的引物對，其特征在于，

所述引物對的正向引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.1所示，所述引物對的反向引物的核苷酸序列由SEQ ID NO.2所示；

正向引物的5’端和反向引物的5’端中的至少一端由熒光基團標記。

8.根據權利要求7所述的引物對，其特征在于，

所述熒光基團包括FAM、HEX、TAMARA、ROX中的任意一種。

9.權利要求7或8所述的引物對在制備用于檢測HTT基因CAG三核苷酸重復序列的試劑或試劑盒中的應用。

10.權利要求7或8所述的引物對在HTT基因CAG三核苷酸重復序列檢測中的應用。