[發明專利]一種細菌固定化方法及應用

在審

• 申請號: 201910572216.8
• 申請日: 2019-06-28
• 公開（公告）號: CN110343692A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 李篤信;趙磊;張健;張真慶
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/08;C12P17/06
• 代理公司: 蘇州翔遠專利代理事務所(普通合伙) 32251
• 代理人: 陸金星

1.一種細菌固定化方法，其特征在于，包括步驟：

(1)菌種的富集：在無菌條件下將LH-52、TM-30、EggerthellaYY7918菌株接種于液體培養基上進行培養，培養結束后，離心收集菌體，洗滌，保存；

(2)菌種的固定化：將所述菌體包埋到載體微球上，獲得固定化的細菌球，用無菌水洗滌；

(3)裝柱與活化：將所述固定化的細菌球裝填到層析柱，獲得固定化細菌柱，用溶液進行活化，制成微生物反應器。

2.根據權利要求1所述的一種細菌固定化方法，其特征在于：步驟(1)中所述液體培養基的成份為蛋白胨、牛肉浸粉、氯化鈉；所述液體培養基的pH為7.2±0.2；所述培養為在37℃下厭氧培養24-48h；所述離心的速度為10000r/min，時間為10min；所述洗滌為用磷酸鹽緩沖液洗滌3次；所述保存溫度為4℃。

3.根據權利要求1所述的一種細菌固定化方法，其特征在于：步驟(2)中所述載體微球為海藻酸鈉、聚乙烯醇、瓊脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、卡拉膠或明膠-戊二醛中的任意一種或多種組合，所述LH-52、TM-30、EggerthellaYY7918菌株分別包埋到多個載體微球上，或者所述LH-52、TM-30、EggerthellaYY7918菌株同時包埋到同一個載體微球上。

4.根據權利要求1所述的一種細菌固定化方法，其特征在于，步驟(2)中所述將所述菌體包埋到載體微球上，獲得固定化的細菌球，用無菌水洗滌具體為：將2％的海藻酸鈉浸泡24h后加熱溶解，取2mL的菌液稀釋2倍，兩者混合均勻，用滴加裝置將其慢慢滴入5％CaCl₂溶液，并用玻璃棒不斷攪拌，冰浴條件下交聯3-6h，獲得固定化的細菌球，過濾后，用無菌磷酸鹽緩沖液洗滌所述固定化的細菌球2-3次，放入冰箱4℃保存。

5.根據權利要求1所述的一種細菌固定化方法，其特征在于：步驟(3)中所述固定化的細菌球為LH-52、TM-30、EggerthellaYY7918細菌球中的任意一種或者多種組合；所述層析柱為玻璃柱、塑料柱或不銹鋼柱中的任意一種；所述溶液為葡萄糖溶液或培養液；所述活化時間為5～30h。

6.根據權利要求5所述的一種細菌固定化方法，其特征在于：所述培養液為厭氧培養液，其配方為：磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、硫酸銨、氯化鈣、硫酸鎂、刃天青、L-半胱氨酸、L-抗壞血酸、碳酸鈉、牛肉浸粉、蛋白胨、瓊脂，所述厭氧培養液的pH為7.5-8.0。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的一種細菌固定化方法在制備雌馬酚中的應用。

8.根據權利要求7所述的一種細菌固定化方法在制備雌馬酚中的應用，其特征在于，包括步驟：將待降解反應物溶解于緩沖液中，然后輸送到所述微生物反應器上，細菌將所述待降解反應物降解，生成產物，收集流出液。

9.根據權利要求8所述的一種細菌固定化方法在制備雌馬酚中的應用，其特征在于：所述待降解反應物為大豆異黃酮、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素、黃豆黃素、黃豆黃素苷元中的任意一種或幾種；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液和Tris三羥甲基甲烷緩沖液，所述緩沖液的pH范圍為6.4～7.5。