[發明專利]一種利用異檸檬酸脫氫酶2評價低劑量伽馬射線輻照生物損傷的方法

在審

• 申請號: 201910568694.1
• 申請日: 2019-06-27
• 公開（公告）號: CN110196320A
• 公開（公告）日: 2019-09-03
• 發明（設計）人: 丁德馨;胡南;易嵐;龍鼎新;趙維超;殷杰;穆紅香;李廣悅
• 申請（專利權）人: 南華大學
• 主分類號: G01N33/49
• 分類號: G01N33/49
• 代理公司: 湖南省國防科技工業局專利中心 43102
• 代理人: 馮青

本發明涉及一種利用異檸檬酸脫氫酶2評價低劑量伽馬射線輻照生物損傷的方法。根據C57BL/6J小鼠接受的低劑量伽馬射線輻照劑量與血清中IDH2的相對表達量的下調率的劑量?效應關系，C57BL/6J小鼠血清中IDH2的相對表達量的下調率，評估低劑量伽馬射線輻照的生物損傷。在建立低劑量率輻照C57BL/6J小鼠模型的基礎上，用iTRAQ技術篩選出有意義的差異表達蛋白，并用Western blot進行驗證。本方法具有對低劑量輻射敏感、可靠性高、特異性強等多重優點。

技術領域

本發明屬于低劑量伽馬射線輻照生物損傷評價技術領域，利用分子標記物進行低劑量伽馬射線輻照生物損傷評價的方法，具體是利用C57BL/6J小鼠血清中異檸檬酸脫氫酶2(Isocitrate dehydrogenase 2 , IDH2)的相對表達量下調率來評價低劑量伽馬射線輻照生物損傷的方法。

背景技術

“核污染”是指天然放射性核同位素以及人工合成核同位素在環境中擴散的過程。它不僅包括核輻照、原子塵埃等本身引起的污染，還有這些物質對環境的污染后帶來的次生污染。伽馬射線輻照能導致細胞組分和結構發生顯著變化，并對生物體造成嚴重的損害。高劑量的電離輻照短期會對生物個體產生急性傷害，容易被檢測和評估，而低劑量電離輻照一般不會引起生物個體的急性反應往往不被重視。隨著伽馬射線輻照廣泛用于醫療保健、核軍工、食品藥品滅菌等領域，增加了人體暴露，公眾越來越關注低劑量伽馬射線輻照對生物體的影響。因此，篩選出檢測速度快、對低劑量電離輻照敏感性、特異性強、可靠性高的生物標志物對低劑量伽馬射線輻照損傷進行評價具有十分重要的意義。

生物標志物不僅可以估算伽馬射線輻照劑量，還可以檢測和評估伽馬射線輻照對健康的影響，同時也可用于臨床和醫療管理。伽馬射線輻照損傷的早期生物標志物對暴露于伽馬射線輻照人員的分類，治療和隨訪以及放射治療之前，治療期間以及治療之后的放射性毒性評估是至關重要的。生物體可能通過改變蛋白質的表達水平及其翻譯后修飾狀態來響應伽馬射線輻照。iTRAQ 技術是新興的高通量蛋白質組學方法，通過特異性標記多肽的氨基基團，然后進行串聯質譜分析，可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量或絕對含量。因此，可以通過iTRAQ 技術篩選組織樣品中差異表達的蛋白質來確定與伽馬射線輻照相關的生物標志物。

發明內容

本發明提供一種利用C57BL/6J小鼠血清中異檸檬酸脫氫酶2（IDH2）的相對表達量的下調率來評價低劑量伽馬射線輻照損傷的方法。本發明利用C57BL/6J小鼠血清中異檸檬酸脫氫酶2（IDH2）對低劑量伽馬射線輻照非常敏感的特性，根據C57BL/6J小鼠接受的低劑量伽馬射線輻照劑量與血清中IDH2的相對表達量的下調率的劑量-效應關系，C57BL/6J小鼠血清中IDH2的相對表達量的下調率，評估低劑量伽馬射線輻照的生物損傷。其原理是，發明人通過iTRAQ 技術篩選發現了接受低劑量伽馬射線輻照后C57BL/6J小鼠血清中的IDH2的相對表達量對低劑量伽馬射線輻照非常敏感，且存在一定的劑量-效應關系。IDH2是調節線粒體氧化還原平衡和通過產生NADPH減少氧化應激誘導的細胞損傷的關鍵酶，血清中IDH2表達下調，可能破壞線粒體氧化還原，誘導氧化損傷。在一定的低劑量電離輻照劑量范圍內，機體受到的輻照損傷越大，IDH2的相對表達量就越低，IDH2蛋白表達的高低直接與人體輻照氧化損傷程度密切相關，該方法具有對劑量輻照敏感、可靠性高、特異性強等多重優點。

具體步驟是：

（1）建立低劑量輻照C57BL/6J小鼠模型；

（2）采集血清；

（3）IDH2相對表達量下調率的檢測；

（4）輻照損傷綜合評價。

具體步驟如下：

其進一步的措施是：

所述的建立低劑量輻照C57BL/6J小鼠模型具體方法為：