[發(fā)明專利]一種低強(qiáng)度脈沖超聲刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910567977.4
• 申請日: 2019-06-27
• 公開（公告）號: CN110777142A
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏偉梁;曾慶玉;洪士彬;程燚睿;孫俊峰
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/09;C12N5/071
• 代理公司: 31227 上海伯瑞杰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 周一新

1.一種低強(qiáng)度脈沖超聲刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：在37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞，待細(xì)胞長至80％，移除培養(yǎng)皿中培液，并沿皿壁加入PBS溶液清洗細(xì)胞，換上無外泌體的胎牛血清培液；

步驟二：將步驟一的培養(yǎng)皿用封口膜包裹，進(jìn)行低強(qiáng)度脈沖超聲刺激20分鐘，在超凈臺中去除封口膜，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時；

步驟三：收取步驟二培養(yǎng)皿中的培液，超速離心分離外泌體，并進(jìn)行形態(tài)鑒定；

步驟四：富集步驟三所得外泌體；其中，所述低強(qiáng)度脈沖超聲的超聲強(qiáng)度小于5W/cm²。

2.如權(quán)利要求1所述刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法，其特征在于，所述低強(qiáng)度脈沖超聲的超聲強(qiáng)度為0.6～3.4W/cm²。

3.如權(quán)利要求2所述刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法，其特征在于，所述低強(qiáng)度脈沖超聲的超聲強(qiáng)度為0.6～2.1W/cm²。

4.如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法，其特征在于，所述細(xì)胞來源于哺乳動物。

5.如權(quán)利要求4所述刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法，其特征在于，所述細(xì)胞包括肺癌細(xì)胞系SPC-A1、肺癌細(xì)胞系SPC-A1-BM、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549或人胚胎腎細(xì)胞293T中一種或兩種以上組合。

6.如權(quán)利要求1所述刺激促進(jìn)細(xì)胞外泌體分泌的方法，其特征在于，所述外泌體濃度檢測通過納米粒子追蹤分析系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)。