[發明專利]一種通過羽色結合分子遺傳標記鑒別PGC移植后代雞的鑒定方法在審
| 申請號： | 201910563547.5 | 申請日： | 2019-06-26 |
| 公開（公告）號： | CN110283894A | 公開（公告）日： | 2019-09-27 |
| 發明（設計）人： | 左其生;金晶;李碧春;趙瑞豐;李婷婷;袁霞;靳鍇 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869;A01K67/027 |
| 代理公司： | 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 沈志海 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 后代 鑒別 羽色 結合分子 遺傳標記 移植 生物技術領域 微衛星標記 技術支持 遺傳來源 種質資源 禽類 復原 物種 遺傳 基因 分析 成功 生產 | ||
1.一種通過羽色結合分子遺傳標記鑒別PGC移植后代雞的鑒定方法,其特征是,以黑羽狼山雞為供體，隱性白羽雞為受體，在孵化2.5天隱性白羽雞的雞胚血管中移植黑羽狼山雞的PGC，受體雞孵化飼養至性成熟，群內自交產生后代,通過黑白羽色結合微衛星標記鑒別生殖配子的來源。
2.根據權利要求1所述的一種通過羽色結合分子遺傳標記鑒別PGC移植后代雞的鑒定方法,其特征是,具體做法如下:
(1)在體式顯微鏡下分離孵化至4.5天的狼山雞雞胚生殖嵴，胰酶消化三分鐘，加入培養液終止消化,400目濾布過濾后以1400轉/分鐘，離心8分鐘，棄上清，加入3ml培養液差速貼壁40分鐘兩次收集細胞懸液；
(2)將收集好的細胞懸液進行細胞計數，調整細胞濃度為3000個細胞/μl，注射1μl進2.5天的隱性白羽雞雞胚血管中；
(3)將注射有狼山雞PGC的隱性白羽雞種蛋孵化并飼養至性成熟；
(4)將飼養至性成熟的隱性白羽雞進行群內自交，得到后代；
(5)觀察后代羽色，黑色為陽性雞即狼山雞供體細胞后代，白色為陰性雞即受體雞后代；
(6)采20μl以上的陽性雞血液，提取基因組；
(7)PCR擴增LEI094片段；
(8)PCR擴增產物送至測序公司進行毛細管測序分析；
(9)根據測序峰圖比對LEI094微衛星片段長度，僅含有長度為290、294或同時含有290和294的微衛星片段的微衛星樣本為顯性純合狼山雞后代；若同時含有長度為290或294和311的樣本為狼山雞與隱性白羽雞的雜合后代；若僅含有311的樣本為隱性白羽雞的純合后代。
3.根據權利要求2所述的一種通過羽色結合分子遺傳標記鑒別PGC移植后代雞的鑒定方法,其特征是,步驟(5)中，觀察后代羽色，以翅根羽色為準。
4.根據權利要求2所述的一種通過羽色結合分子遺傳標記鑒別PGC移植后代雞的鑒定方法,其特征是,步驟(7)中，PCR體系如表1，PCR擴增程序如表2：
表1 LEI094PCR反應體系
試劑 體積 金牌Mix 45μl LEI094上游引物 2μl LEI094下游引物 2μl 基因組模板 1μl
表2 LEI094 PCR反應程序
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