[發(fā)明專利]一種提升人體脂肪含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910563327.2
• 申請(qǐng)日: 2019-06-26
• 公開（公告）號(hào): CN110305838A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳威
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳威
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077;A61L27/36;A61L27/38;A61L27/22;A61L27/54
• 代理公司: 北京棘龍知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11740
• 代理人: 謝靜

本發(fā)明公開了一種提升人體脂肪含量的方法，包括以下步驟：S1、無菌條件下取人體皮下脂肪組織，將其移入預(yù)先盛有D?Hanks液的平皿，漂洗5～8次，用眼科剪去除脂肪組織中可見的血管和結(jié)締組織；S2、然后剪切組織塊至8～10mm三小塊，用組織勻漿機(jī)180～200r/min勻漿至乳糜狀；繼而加入0.1％膠原酶I培養(yǎng)基消化30min，其間每5min振蕩1次，S3、經(jīng)200目不銹鋼細(xì)胞篩過濾去除未消化組織塊及大體積的脂肪細(xì)胞，將細(xì)胞懸液移入離心管，2000r/min離心5min；棄去離心后的上清液。該提升人體脂肪含量的方法，通過通過無菌膜穩(wěn)定試劑以及PRP和重組人VEGF?C處理后的脂肪細(xì)胞群，在遞送或給予受試者之前、期間或之后，能增加脂肪細(xì)胞群的移植物的存活率，從而極大的增加了人體脂肪的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及脂肪細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種提升人體脂肪含量的方法。

背景技術(shù)

在血管生成過程中依賴多種生長因子的活性，例如，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，堿性成纖維生長因子(bFGF)和血小板衍生生長因子(PDGF)。

血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種分泌性糖蛋白，起著維持原有血管密度及維持血管對(duì)運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)所必需的通透性的作用。VEGF的生物學(xué)作用包括：促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，VEGF可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)蛋白水解酶、間質(zhì)膠原酶和組織因子，降解細(xì)胞外基質(zhì)，使得血管內(nèi)皮細(xì)胞向內(nèi)生長，從而誘導(dǎo)血管形成。提高血管的通透性，Roberts等發(fā)現(xiàn)，VEGF作用致內(nèi)皮細(xì)胞之間的間隙增大，同時(shí)導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞上出現(xiàn)穿孔。此作用發(fā)生于毛細(xì)血管后微靜脈及毛細(xì)血管和肌肉靜脈水平。血管生成是脂肪移植存活率提高的關(guān)鍵，而在此過程中的各個(gè)階段均有VEGF表達(dá)的增強(qiáng)，作為血管生成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，VEGF在血管再生過程中發(fā)揮著重要作用。

VEGF表達(dá)的調(diào)節(jié)受到一些血清來源和旁分泌的生長因子與細(xì)胞因子的影響，包括血小板源生長因子(PDGF)、成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、表皮生長因子(EGF)、腫瘤壞死因子(TNF)、轉(zhuǎn)移生長因子(TGF)等都能使許多培養(yǎng)皮膚細(xì)胞中的VEGF表達(dá)高3-20倍，而創(chuàng)傷修復(fù)各階段均有上述生長因子的表達(dá)。其中，bFGF對(duì)其有直接的調(diào)節(jié)作用，因?yàn)閎FGF可以上調(diào)VEGF的產(chǎn)生，二者具有協(xié)同作用。

富血小板血漿(PRP)是通過離心自體全血而獲得的血小板濃縮物。因PRP可來源于自體，其獲取簡(jiǎn)便，無免疫排斥反應(yīng)，并發(fā)癥少，研究證實(shí)，PRP還具有使脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化的作用。國內(nèi)外已有將PRP應(yīng)用于顱面及皮膚軟組織修復(fù)等的研究報(bào)道。Willemsen等做了24例富血小板血漿自體脂肪的雙側(cè)臀部移植，結(jié)果證實(shí)臀部的PRP脂肪注入術(shù)是安全有效的，其具有低并發(fā)癥和持續(xù)穩(wěn)定性?？傊甈RP混合自體顆粒脂肪組織移植能加速移植組織早期血管重建，避免纖維化和脂肪細(xì)胞凋亡。

由于外傷和老化，自體脂肪移植是用于軟組織增添和填充軟組織缺損的普遍和理想的技術(shù)。最新證據(jù)表明由于其吸收和脂肪的低存活率，脂肪移植物的早期和足夠的血管化是必不可少的。然而，由于移植后脂肪細(xì)胞死亡增加，脂肪移植物的相對(duì)較高的再吸收率降低了該技術(shù)的效力。雖然血管生成因子(Kuramochi等，2008)，以及VEGF基因治療(Lei等，2008)已被單獨(dú)用于在脂肪移植物中刺激血管生成，以提高脂肪細(xì)胞的存活率和生存能力，但是臨床結(jié)果卻不盡人意。因此，降低移植脂肪的再吸收率是臨床上的一個(gè)挑戰(zhàn)。

已經(jīng)嘗試各種促進(jìn)移植的方法，以下總結(jié)其中的一些。

PCT公布NO.2005/018549公開了用于組織修復(fù)(如骨、軟骨)的方法和組合物。根據(jù)其教導(dǎo)，組織移植物(如脂肪組織、肌肉組織)可離體與一種或更多種的生物活性劑(如促紅細(xì)胞生成素)接觸，從而刺激組織中的至少一部分細(xì)胞分化成所需類型的細(xì)胞(如骨細(xì)胞)，然后將該組織植入受試者中。