[發明專利]一種軟棗獼猴桃單倍體植株的培育方法

在審

• 申請號: 201910562224.4
• 申請日: 2019-06-26
• 公開（公告）號: CN110150151A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 任云;李強;李哲馨
• 申請（專利權）人: 重慶文理學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 徐云俠

本發明涉及獼猴桃栽培技術領域，具體公開一種軟棗獼猴桃單倍體植株的培育方法，具體包括以下步驟：步驟a.采集軟棗獼猴桃小孢子處于單核期的花蕾，冷藏；步驟b.消毒處理；步驟c.分離花粉；步驟d.誘導培養；步驟e.繼續暗培養至胚發育成成熟胚，再在植株分化培養基上培養，最后轉移到生根培養基上培養生根。本發明提供的軟棗獼猴桃單倍體植株的育種方法，培育出的軟棗獼猴桃植株相較于現有技術使用花藥離體培養，單倍體獼猴桃植株培育率高。

技術領域

本發明涉及軟棗獼猴桃培育技術領域，具體公開一種軟棗獼猴桃單倍體植株的培育方法。

背景技術

軟棗獼猴桃是獼猴桃科、獼猴桃屬大型落葉藤本植物。果實營養豐富，含有20多種氨基酸和多種維生素，特別是維生素C含量是其他水果的幾十倍，是開發功能保健食品的絕佳原料；果型“迷你”小巧，果面光滑無毛，種子小，非常適合鮮食和加工成整果罐頭、果脯等。該種獼猴桃分化強烈，分布廣闊，中國從最北的黑龍江岸至南方廣西境內的五嶺山地都有分布。

軟棗獼猴桃一般為四倍體，基因高度雜合，具有豐富的遺傳多樣性，傳統的雜交育種周期長，效率低，具有很大的不確定性。而將軟棗獼猴桃植株培育成單倍體植株，再將單倍體植株經染色體加倍，在一個世代中即可出現純合的二倍體，從中選出的優良純合系后代不分離，表現整齊一致，可明顯縮短軟棗獼猴桃的育種年限。但現有技術中使用花藥離體培養對軟棗獼猴桃進行單倍體育種，易受花藥中其它體細胞的干擾，培育出的植株不一定為單倍體植株，需要對培育成的植株進行染色體倍數檢測后再篩選。

發明內容

本發明提供一種軟棗獼猴桃單倍體植株的育種方法，單倍體獼猴桃植株培育率高。

一種軟棗獼猴桃單倍體植株的培育方法，具體包括以下步驟：

步驟a.采集軟棗獼猴桃小孢子發育處于單核期花蕾，低溫濕潤條件下保存20-30h；

步驟b.將經過低溫保存后的花蕾進行消毒處理；

步驟c.分離花粉；

步驟d.將分離得到的花粉接種于愈傷組織誘導培養基中，暗培養10-15d；

步驟e.待步驟d中暗培養后的花粉形成肉眼可見的胚后，繼續暗培養至胚發育成成熟胚，再在植株分化培養基上培養40-50d，最后轉移到生根培養基上培養生根，即可。

優選地，步驟a中，采集軟棗獼猴桃花粉處于單核靠邊期的花蕾。

優選地，步驟a中所述低溫為1-5℃，所述保存時間為24h。

優選地，步驟b中所述消毒處理過程為：先用質量分數為70-75％乙醇溶液浸潤花蕾20-40s，再在飽和漂白粉溶液中浸泡10-20min，之后用無菌水漂洗3-5次。

優選地，步驟c中所述分離花粉的方法為：剝離花藥，將花藥在無菌條件下插接到無菌MS固體培養基上，當花藥自動裂開，移開花藥，收集花粉。

優選地，所述愈傷組織誘導培養基的組分為：MS培養基+2mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸+1mg/L KT+0.5-1.5mg/L玉米汁。

優選地，步驟d中所述暗培養溫度為30-35℃。

優選地，步驟e中所述暗培養條件為：25℃振蕩培養7-10d，振蕩頻率為60-100r/min。

優選地，步驟e中所述植株分化培養基的組分為：MS培養基+0.01mg/L GA₃+150-200g/L香蕉泥，在所述植株分化培養基上培養的具體方法為：于20℃、16h光培養及8h暗培養交替、2000LUX光強條件下進行培養。

優選地，步驟e中所述生根培養基的組分為：1/2MS+0.1mg/L IBA+0.2g/L活性炭。