[發明專利]用于間接檢測米酵菌酸的毒黃素半抗原及其合成方法

有效

• 申請號: 201910558883.0
• 申請日: 2019-06-14
• 公開（公告）號: CN110305139B
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發明（設計）人: 柯躍斌;李金峰;黎誠耀;丁曄;趙芳;肖云軍;劉博超
• 申請（專利權）人: 深圳市疾病預防控制中心（深圳市衛生檢驗中心;深圳市預防醫學研究所）
• 主分類號: C07D487/04
• 分類號: C07D487/04;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/79;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 許青華;廖苑濱

本發明公開了毒黃素半抗原、人工抗原、抗體及其合成方法和應用。本發明中，在毒黃素1位上的氮原子上衍生脂肪鏈連接臂，衍生的脂肪鏈連接臂末段帶有羧基，本發明的毒黃素半抗原最大程度保留了毒黃素的特征結構，能更好地暴露半抗原的抗原決定簇，使得毒黃素半抗原的免疫原性明顯增強，又具有可以與載體蛋白發生偶聯的羧基；該毒黃素半抗原與載體蛋白偶聯后得到的毒黃素免疫抗原去免疫動物，更有利于刺激動物免疫應答產生特異性更強、靈敏度更高的抗體，采用該抗體的免疫學方法可以檢測出0.02ng/ml的毒黃素污染，為米酵菌酸中毒提供了簡便快捷的解決方案，整個檢測流程只需要十多分鐘，完全能夠滿足實際檢測需求。

技術領域

本發明涉及了免疫化學分析技術領域，特別是涉及了用于間接檢測米酵菌酸的毒黃素半抗原及其合成方法。

背景技術

酵米面中毒是我國廣大農村致死率極高的一種細菌性食物中毒。椰毒假單胞菌酵米面亞種是引起酵米面食物中毒和變質銀耳中毒的原因，研究證明該菌的致病物質是其在生長繁殖過程中產生的兩種毒素：米酵菌酸(bongkrekic acid,BA)和毒黃素(toxoflavin,TF)。兩種毒素均為脂肪酸類的小分子物質，具有劇毒、耐熱、毒性強，不能被一般的烹調方法所破壞，故食品被污染后極易引起中毒，目前尚無特效解毒藥物，且米酵菌酸的產量遠高于毒黃素。

目前用于檢測米酵菌酸的方法主要有傳統的檢測方法，如分光光度法、高效液相色譜法及其聯用技術等，以上方法雖然可以精確定量，但由于設備儀器昂貴，檢測時間長，且需專業人員操作，因此無法實現真正意義上的現場檢測。而免疫學檢測分析技術以其高靈敏、特異性高、快速、操作簡便等優點在藥物殘留檢測領域已被廣泛應用，比起儀器等檢驗方法有很多優勢。所以免疫分析為米酵菌酸殘留研究提供了一條新的分析檢測方法。

在建立免疫學檢測方法并應用該檢測方法檢測米酵菌酸殘留量時，關鍵技術在于能夠獲取到特異性強、靈敏度高的抗體，而要實現這一目標，前提條件就是得合成、制備出合適的米酵菌酸半抗原。但是米酵菌酸為鏈狀結構，免疫動物難以獲得高質量的抗體。而毒黃素則是由兩個并環組成的立體狀的分子，相對于米酵菌酸，免疫動物更容易獲得高靈敏、高特異的抗體。通過免疫檢測毒黃素可以間接檢測米酵菌酸，對米酵菌酸的中毒檢測提供一種簡便可靠的檢測方案。但是，目前，國內還沒有針對毒黃素半抗原的相關報道。

發明內容

為了彌補已有技術的缺陷，本發明提供用于間接檢測米酵菌酸的毒黃素半抗原及其合成方法。

本發明所要解決的技術問題通過以下技術方案予以實現：

毒黃素半抗原，其具有如下結構式：

其中，n為-CH₂基團數目，n為2-8的整數。

本發明還提供上述毒黃素半抗原的合成方法，包括如下步驟：

S1. 6-氯-3-甲基嘧啶與化合物1進行反應，得到化合物2，所述化合物1的分子式為：BocNH-NH(CH₂)_nCOOMe，其中，n為-CH₂基團數目，n為2-8的整數；所述化合物2具有結構式其中，n為-CH₂基團數目，n為2-8的整數；

S2.所述化合物2與三氟乙酸進行反應，得到化合物3，所述化合物3具有結構式其中，n為-CH₂基團數目，n為2-8的整數；

S3.在酸性條件下，所述化合物3與甲醛進行反應，得到化合物4，所述化合物4具有結構式其中，n為-CH₂基團數目，n為2-8的整數；

S4.在亞硝酸鈉和乙酸存在下，所述化合物4進行反應，得到化合物5，所述化合物5具有結構式其中，n為-CH₂基團數目，n為2-8的整數；