[發明專利]一種加強型高效治療肺癌的NK免疫細胞的制備方法及應用在審
| 申請號： | 201910556693.5 | 申請日： | 2019-06-25 |
| 公開（公告）號： | CN110205293A | 公開（公告）日： | 2019-09-06 |
| 發明（設計）人： | 江良旗 | 申請（專利權）人： | 中冠賽爾生物科技（北京）有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立軍;孫志一 |
| 地址： | 100094 北京市*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單個核細胞 免疫細胞 培養瓶 活化培養基 刺激因子 包被 制備 培養袋 移入 肺癌 體外共培養 體外殺傷 外周血液 瘤細胞 擴增 治療 接種 應用 | ||
1.一種加強型高效治療肺癌的NK免疫細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(a)將刺激因子包被培養瓶；
(b)在人外周血液中分離單個核細胞；
(c)在刺激因子包被的培養瓶中添加活化培養基，再將單個核細胞接種于刺激因子包被的培養瓶中進行培養；
(d)待培養3-4天后，將單個核細胞移入空培養瓶中，再向空培養瓶中添加活化培養基繼續培養；
(e)待培養7-8天后，將單個核細胞移入培養袋中，再向培養袋中添加活化培養基繼續培養，待培養14-16天后，收集單個核細胞。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(a)中，刺激因子為CD16、TIL-9或4-1BBL。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(b)中，在人外周血液中采用密度梯度離心法分離單個核細胞。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述活化培養基為含有IL-2、IL-12和IL-15的無血清培養基，其中IL-2濃度為950-1050u/ml，IL-12濃度為8-12ng/ml，IL-15濃度為8-12ng/ml。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(c)中，單個核細胞的接種濃度為(2-5)×106個/ml。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(c)至步驟(e)中，培養溫度為37℃，二氧化碳濃度為5％。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(d)或步驟(e)中，活化培養基添加至單個核細胞濃度為(1-3)×106個/ml。
8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(e)中，收集的單個核細胞中NK免疫細胞含量不小于90％。
9.權利要求1-8任一所述的制備方法制備得到的NK免疫細胞在制備治療肺癌藥物中的應用。
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