[發(fā)明專利]一種制備動(dòng)物成熟神經(jīng)元單細(xì)胞的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910553747.2
• 申請(qǐng)日: 2019-06-25
• 公開（公告）號(hào): CN110218700A
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖振
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海卡序生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0793
• 分類號(hào): C12N5/0793
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種制備成熟神經(jīng)元單細(xì)胞的方法，其特征在于，所述方法具體包括以下步驟：

(1)獲取目的動(dòng)物組織，所述目的動(dòng)物組織中含目的動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞；

(2)將切碎后的目的動(dòng)物組織與HABG消化緩沖液混合，每3-8mg組織添加1mL HABG，進(jìn)行組織消化，消化條件為33-37℃恒溫，100-200rpm消化20-50min；

(3)將消化后的組織進(jìn)行離心，留沉淀，加入HABG消化緩沖液吹打沉淀；

(4)將(3)中獲得的溶液中的未被消化的組織及大的碎片過(guò)濾掉；

(5)將(4)中獲得的含有細(xì)胞的HABG溶液加入到細(xì)胞梯度分離液中，含有目的動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的HABG溶液和梯度分離液的體積比為(3:2)-(2:1)，混勻后離心。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中將消化好的組織于180-200g，3-5℃離心5-8min。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中將預(yù)先用D-PBS浸潤(rùn)過(guò)的10-100μm的篩網(wǎng)套至干凈的離心管中，將上述含有目的動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞的HABG溶液加入篩網(wǎng)中過(guò)濾未被消化的組織及大的碎片。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中獲取目的組織的方法包括：將小鼠麻醉，利用冰上預(yù)冷的D-PBS進(jìn)行心臟灌流至流出液體為無(wú)色，在冰上迅速取出小鼠大腦或脊髓，切取目的區(qū)域，迅速將所取區(qū)域切碎。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中加入細(xì)胞梯度分離液后600-1000g，20-24℃離心12-18min。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)離心后棄去最靠近管口的一層液體，取剩余溶液中從管口至管底的第三層。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，細(xì)胞梯度分離液現(xiàn)配現(xiàn)用。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中離心管中加入細(xì)胞梯度分離液時(shí)，預(yù)先將離心管內(nèi)壁濕潤(rùn)。

9.如權(quán)利要求1或2或5或6所述的方法，其特征在于，離心分離細(xì)胞時(shí)使用水平轉(zhuǎn)子的離心機(jī)。

10.權(quán)利要求1-9任一所述的方法在單細(xì)胞測(cè)序分析或者成熟神經(jīng)元培養(yǎng)方面的應(yīng)用。