[發(fā)明專利]一種EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910551879.1
• 申請日: 2019-06-25
• 公開（公告）號: CN110317778A
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡仕君;陳瑞愛;羅順;李延鵬;沈永義;黃梅;葉俊賢;王嘉琪;溫良海;羅瓊
• 申請（專利權(quán)）人: 華農(nóng)（肇慶）生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;C12N5/02
• 代理公司: 廣州市科豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44467
• 代理人: 龔元元

1.一種EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基為以DMEM：F12＝1:1的DMEM/F12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加氨基酸混合組分、添加劑A、PF-68、葡萄糖得到，添加劑A中各物質(zhì)在所述培養(yǎng)基中濃度為：

胰島素1-10mg/L；IGF-1 5-10μg/L；腐胺0.5-2mg；谷胱甘肽0.5-5mg/L；乙醇胺1-5mg/L；β-巰基乙醇10-50μM；卵磷脂1-5mg/L；維生素C 10-50mg/L；牛磺酸50-100mg/L；膽固醇2-5mg/L；谷氨酰胺3-6mM；

每1L培養(yǎng)基中所述氨基酸混合組分添加量為1000mg-3000mg；

所述氨基酸混合組分不含谷氨酰胺且各氨基酸比例與基礎(chǔ)培養(yǎng)基中各氨基酸比例相同；

培養(yǎng)基中PF-68的濃度為1000mg/L；葡萄糖濃度為3000-5000mg/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基為以DMEM：F12＝1:1的DMEM/F12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加氨基酸混合組分、添加劑A、PF-68、葡萄糖、添加劑B得到，添加劑B中各物質(zhì)在所述培養(yǎng)基中濃度為：

Na₂SeO₃ 5-10nM；MnSO₄ 0.5-5nM；CuSO₄ 5H₂O5-10 nM；ZnSO₄ 7H₂O 1-5μM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基的pH為7.0-7.2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基，其特征在于，每1L培養(yǎng)基中所述氨基酸混合組分添加量為1000mg、2000mg或3000mg；

所述培養(yǎng)基中葡萄糖濃度為5000mg/L。

5.一種如權(quán)利要求1-4任一所述的EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：以DMEM：F12＝1:1的DMEM/F12培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按照基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組分準備原料1，并按照濃度準備氨基酸混合組分、添加劑A、PF-68、葡萄糖；

步驟2：將步驟1準備的原料1、氨基酸混合組分、添加劑A、PF-68、葡萄糖用純化水溶解后加入20000mg/L的碳酸氫鈉，再用酸或堿調(diào)節(jié)pH值至7.0-7.2之間，過濾除菌，2-8℃保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述EB66細胞株懸浮生長無血清化學(xué)成分界定培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述步驟1中，還準備添加劑B并加入到步驟2的純化水中。