[發明專利]檢測中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜的ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201910550683.0
• 申請日: 2019-06-24
• 公開（公告）號: CN110376384B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發明（設計）人: 胡福良;張言政;鄭火青;張翠平
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/535;C12N15/12;C12N15/70;C07K14/435
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供一種檢測中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜的ELISA檢測試劑盒，選擇MRJP2(王漿主蛋白2)作為中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜檢測的目標蛋白，以原核表達純化的方法得到中蜂MRJP2和意蜂MRJP2，制備純化得到兩者的特異性和同一性抗體，以雙抗體夾心法開發中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜檢測試劑盒。本試劑盒具有很高的靈敏度，通過肉眼觀察顯色情況，能夠在45min內鑒定出中蜂蜂蜜中1％比例的意蜂蜂蜜摻入，滿足方便快捷的檢測要求，是中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜檢測的可靠工具。

技術領域

本發明屬于蜂產品檢測領域，涉及一種中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜的ELISA檢測試劑盒。

技術背景

中蜂蜂蜜作為中國特有蜂蜜品種，深受國人喜愛，但其產量較低，在國內市場上，中蜂蜂蜜的零售價格一般在80-200元/500g，是國產意蜂蜂蜜價格的三到五倍。受利益驅使，市場上用意蜂蜂蜜冒充或摻入中蜂蜂蜜中的現象十分猖獗，加之相關檢測方法的缺失，導致造假者更加肆無忌憚，使中蜂蜂蜜的生產者和消費者蒙受損失。目前市場上還未有相關的檢測試劑盒，為了遏制此種造假摻假現象，滿足行業對快速靈敏檢測的需求，非常有必要進行相關檢測試劑盒的開發。

MRJPs是蜜蜂咽下腺分泌的一組同源蛋白，由MRJP1-9組成。MRJPs具有比較好的免疫原性，可以制備MRJPs的抗體并用于相關檢測。蜂蜜中的MRJPs組成與蜂王漿類似，只是在含量上低了三到四個數量級，MRJPs是蜂蜜中水溶性蛋白的主要成分，其中MRJP1-3是其中含量最高的三種。MRJPs是蜂蜜中穩定存在的固有成分，根據其免疫特性，用MRJPs作為蜂蜜蜂種來源檢測的內源性標記物是可行的思路。中蜂與意蜂的MRJPs具有蜂種差異性，這為制備兩者的特異性抗體提供了可能。

酶聯免疫吸附實驗(ELISA)是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體在固相表面進行反應的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有特異性強、快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點，廣泛應用于快速診斷檢測領域。

為了提高檢測的靈敏度，快速準確地檢測中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜，滿足行業對快速靈敏檢測的需求，本發明基于MRJPs制備得到中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜蜂種特異性抗體，并在特異性抗體的基礎上開發了商業化的中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜ELISA檢測試劑盒，可作為中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜檢測的有效、快速的檢測手段。

發明內容

本發明的目的是提供一種中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜檢測的ELISA檢測試劑盒，是一種基于蜂蜜蛋白檢測檢測中蜂蜂蜜與意蜂蜂蜜的雙抗體夾心法ELISA檢測試劑盒。

本試劑盒包含以下成分：包被中蜂MRJP2和意蜂MRJP2共有抗體的酶標板(康寧)、HRP標記的特異性中蜂MRJP2抗體、HRP標記的特異性意蜂MRJP2抗體、樣品稀釋液(TBST，1％BSA，0.02％硫柳汞)、清洗液(TBST)、TMB顯色劑A、TMB顯色劑B、陽性對照(中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜)。

本發明試劑盒需于2-8℃避光保存，不正確存放或過于頻繁開啟使用有可能造成使有效期縮短。

本試劑盒通過以下步驟制備：

(1)目標抗原及抗體制備方案的選擇：選擇MRJP2蛋白作為相關抗體制備的目標蛋白。以原核表達的方法得到中蜂MRJP2和意蜂MRJP2。