[發(fā)明專利]植物作為宿主表達(dá)人源端粒酶的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910549715.5
• 申請日: 2019-06-24
• 公開（公告）號(hào): CN110205337A
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王躍駒;陳書元;唐輝
• 申請（專利權(quán)）人: 王躍駒
• 主分類號(hào): C12N15/82
• 分類號(hào): C12N15/82;C12N15/54;C12N9/12
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 劉穎

1.植物作為宿主在表達(dá)端粒酶中的應(yīng)用；所述植物選自生菜、菠菜、番茄、蘿卜、白菜、玉米、大豆、小麥或煙草；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物。

2.一種表達(dá)載體，其特征在于，包括端粒酶的序列以及雙元植物載體。

3.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述端粒酶為人源端粒酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述端粒酶的序列為將端粒酶的密碼子優(yōu)化為植物偏好的密碼子，獲得的優(yōu)化端粒酶的序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于，所述優(yōu)化的端粒酶的序列中核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述優(yōu)化的端粒酶的序列中氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至5任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體，其特征在于，其構(gòu)建方法包括如下步驟：

步驟1：將端粒酶的密碼子優(yōu)化為植物偏好的密碼子，獲得優(yōu)化的端粒酶的序列；

步驟2：在所述優(yōu)化的端粒酶的序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點(diǎn)，在3’末端加入Sac I位點(diǎn)；克隆到pUC57載體中，獲得pTelo克隆載體；

步驟3：通過Xbal/Sacl從步驟2所得的克隆載體中獲得基因片段，克隆至雙元植物載體pCam35S，獲得表達(dá)載體p35S-Telo。

7.根據(jù)權(quán)利要求2至6任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體在表達(dá)端粒酶中的應(yīng)用。

8.一種植物作為宿主表達(dá)端粒酶的方法，其特征在于，將如權(quán)利要求2至6任一項(xiàng)所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質(zhì)，獲得端粒酶。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述植物選自生菜、菠菜、番茄、蘿卜、白菜、玉米、大豆、小麥或煙草；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述農(nóng)桿菌介導(dǎo)真空滲透包括如下步驟：

步驟1：抽真空25～45s；

步驟2：保持真空(-95kPa)壓力30～60s；

步驟3：釋放壓力使得滲透液滲入所述植物組織；

重復(fù)上述步驟2～3次，避光處理4d。