[發(fā)明專(zhuān)利]一種重組畢赤酵母工程菌及其在合成左旋多巴中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910549697.0
• 申請(qǐng)日: 2019-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110305805B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁圍;鐘爽;肖延銘;華超;汪釗;祁瑛;梁阿朋
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué);長(zhǎng)興制藥股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/19
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/19;C12N15/81;C12N15/60;C12N15/31;C12P13/22;C12R1/84
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華;李欣瑋

1.一種重組畢赤酵母工程菌，其特征在于，所述重組畢赤酵母工程菌通過(guò)如下方法獲得：將SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化后，轉(zhuǎn)入到畢赤酵母GS115，構(gòu)建重組畢赤酵母YZ001，隨后將SEQ ID NO.4所示的HAC1在畢赤酵母YZ001中過(guò)量表達(dá)，構(gòu)建獲得重組畢赤酵母工程菌YZ002。

2.如權(quán)利要求1所述的重組畢赤酵母工程菌，其特征在于，所述重組畢赤酵母工程菌的制備方法具體為：

(1)將SEQ ID NO.1所示的酪氨酸酚裂解酶(TPL)的DNA序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化后克隆至畢赤酵母表達(dá)載體pPIC9K而獲得的表達(dá)載體pPIC9K-TPL，將pPIC9K-TPL線(xiàn)性化后，轉(zhuǎn)入畢赤酵母GS115獲得重組畢赤酵母YZ001；

(2)將SEQ ID NO.4所示的HAC1與pPICZαA載體連接，構(gòu)建pPICZαA-HAC1質(zhì)粒，將pPICZαA-HAC1線(xiàn)性化后轉(zhuǎn)入到畢赤酵母YZ001，構(gòu)建獲得重組畢赤酵母工程菌YZ002。

3.一種如權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的重組畢赤酵母工程菌作為催化劑的用途，其特征在于，所述用途為合成左旋多巴的用途。

4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述重組畢赤酵母工程菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵和離心后的上清液用于催化合成左旋多巴。

5.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述發(fā)酵和離心后收集的菌體可重新添加培養(yǎng)基，進(jìn)行下一批的發(fā)酵。

6.如權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述發(fā)酵步驟為：將重組酵母工程菌接種于YPD培養(yǎng)基過(guò)夜培養(yǎng)，隨后以10％的接種量接種于含有無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基的20L發(fā)酵罐中，流加甲醇誘導(dǎo)72小時(shí)。

7.一種左旋多巴的合成方法，該方法以鄰苯二酚，丙酮酸和醋酸銨為底物，以權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的上清液作為催化劑合成左旋多巴。