[發明專利]一種用于產氣腸桿菌檢測的試劑盒有效
| 申請號： | 201910549661.2 | 申請日： | 2019-06-24 |
| 公開（公告）號： | CN110241237B | 公開（公告）日： | 2020-04-10 |
| 發明（設計）人： | 孫澤瑋;陳文靜;鄭良榮 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10 |
| 代理公司： | 杭州求是專利事務所有限公司 33200 | 代理人： | 趙杭麗 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 產氣腸桿菌 檢測 試劑盒 | ||
1.一種用于產氣腸桿菌檢測的試劑盒，其特征在于，由特異性靶向產氣腸桿菌rpoB基因的向導RNA、擴增引物對、水化TwistAmp基礎試劑盒反應干燥球、LbCas12a蛋白、單鏈DNA探針、RNA酶抑制劑和緩沖液組成。
2.根據權利要求1所述的一種用于產氣腸桿菌檢測的試劑盒，其特征在于，其中特異性靶向產氣腸桿菌rpoB基因的向導RNA的核苷酸序列如SEQ No.1所示，RPA擴增引物對的序列如SEQ No.2和SEQ No.3所示，單鏈DNA探針的序列如SEQ No.6所示。
3.根據權利要求1所述的產氣腸桿菌檢測的試劑盒進行產氣腸桿菌快速檢測的方法，其特征在于，通過以下步驟實現：取1ml樣品，95-98攝氏度加熱5min，取1μl作為檢測樣品，加入14.75μl水化TwistAmp basic kit反應干燥球，0.9μl10mM RPA-F和RPA-R，0.375μlRibonucleaseInhibitor，3.5μlbuffer2.1，1000nM向導RNA，250nM LbCas12a，200nM單鏈DNA探針，加水補至25μl，37攝氏度反應25-45min，通過熒光顯微鏡下直接觀察檢測體系熒光變化，進行產氣腸桿菌檢測，發黃綠色熒光說明有產氣腸桿菌污染，不發光說明沒有產氣腸桿菌污染。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，其中RPA-F的序列如SEQ No.2所示，RPA-R序列如SEQ No.3所示，向導RNA序列如SEQ No.1所示。
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