[發(fā)明專利]一種禽傳染性支氣管炎病毒的RT-RAA檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910546537.0 | 申請日： | 2019-06-24 |
| 公開（公告）號： | CN110241261A | 公開（公告）日： | 2019-09-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王素春;王楷宬;黃保續(xù) | 申請（專利權(quán)）人： | 中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 266032 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 禽傳染性支氣管炎病毒 傳染性支氣管炎病毒 快速檢測 引物 檢測 傳統(tǒng)檢測技術(shù) 現(xiàn)場快速檢測 分子生物學(xué) 反向引物 復(fù)雜儀器 正向引物 高通量 探針組 變溫 探針 靈敏 束縛 安全 | ||
1.一種檢測禽傳染性支氣管炎病毒引物對和探針組，其特征在于，所述的引物對中，正向引物的序列為SEQ ID NO:1，反向引物的序列為SEQ ID NO:2，探針的序列為SEQ ID NO:3。
2.如權(quán)利要求1所述的引物對和探針組，其特征在于，所述的探針自5′端起第28位堿基T標(biāo)記FAM發(fā)光基團(tuán)，第29位堿基A后連接脫堿基位點四氫呋喃，第30位堿基T標(biāo)記BHQ1淬滅基團(tuán)，3′端進(jìn)行C3-spacer阻斷修飾。
3.權(quán)利要求1或2所述的引物對和探針在制備檢測禽傳染性支氣管炎病毒的試劑盒中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的試劑盒為RT-RAA檢測試劑盒。
5.一種檢測禽傳染性支氣管炎病毒的檢測試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含有RT-RAA檢測的試劑盒和權(quán)利要求1或2所述的引物對和探針。
6.一種檢測臨床樣品中禽傳染性支氣管炎病毒的RT-RAA檢測方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：
1)配制RT-RAA反應(yīng)體系
總體系50μL，含有反應(yīng)緩沖液25μL，10pmol/μL H9 forward和H9 reverse各2.1μL，10pmol/μL H9 probe 0.6μL，RNase Free dH2O 15.7μL，醋酸鎂2.5μL，RT熒光基礎(chǔ)反應(yīng)單元，待檢測的樣品RNA模板2μL；
2)RT-RAA反應(yīng)體系擴(kuò)增
將檢測反應(yīng)條件設(shè)置為：在39℃下恒溫擴(kuò)增20min；
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):陰性對照無擴(kuò)增曲線，且陽性對照出現(xiàn)擴(kuò)增曲線，則實驗數(shù)據(jù)有效，否則實驗結(jié)果視為無效；
結(jié)果描述及判定:無擴(kuò)增曲線的樣品判為陰性；出現(xiàn)擴(kuò)增曲線判為陽性。
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