[發明專利]DiI染料標記示蹤子宮上皮細胞來源外泌體的方法在審
| 申請號： | 201910544787.0 | 申請日： | 2019-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN110618002A | 公開（公告）日： | 2019-12-27 |
| 發明（設計）人： | 譚強;施爽;褚玲娜;邱寒峰;王爭光 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | G01N1/28 | 分類號： | G01N1/28;G01N21/64 |
| 代理公司： | 33246 浙江千克知識產權代理有限公司 | 代理人： | 冷紅梅 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 子宮上皮細胞 生物功能 體結構 染料 示蹤 胚胎滋養層 染料標記 細胞攝取 孵育 重懸 去除 研究 | ||
1.DiI染料標記外泌體的方法，所述方法包括：將外泌體加入10～30nM的DiI染料中37℃孵育30min后，離心，去除多余的染料，沉淀外泌體，所得外泌體用PBS重懸，得到標記后的外泌體；所述外泌體與DiI染料質量用量之比為：40～60:1。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述外泌體為子宮上皮細胞來源的外泌體。
3.利用權利要求1所述DiI染料標記外泌體，對胚胎滋養層細胞攝取子宮上皮細胞來源外泌體過程進行示蹤的方法，所述方法包括：
(1)將子宮上皮細胞來源外泌體與10～30nM的DiI染料37℃孵育30min；
(2)離心，去除多余的染料，沉淀外泌體，所得外泌體用PBS重懸，加入胚胎滋養層細胞中，37℃培養4～6h；
(3)取出細胞培養板，用PBS清洗多次，加入多聚甲醛固定細胞；
(4)加入PBST做細胞通透性處理；
(5)去除PBST，用PBS清洗多次；
(6)加入phallioidin-FITC，染細胞骨架；
(7)用免疫染色洗滌液去除染料；
(8)加入DAPI染液孵育5min，用PBS清洗細胞多次；
(9)熒光顯微鏡觀察。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述子宮上皮細胞為Ishikawa細胞或HEC-1-A細胞。
5.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述胚胎滋養層細胞為HTR8/SVneo細胞。
6.如權利要求3所述的方法，其特征在于：所述免疫染色洗滌液為0.1M、含1％BSA的PBS。
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