[發(fā)明專利]一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910543375.5
• 申請日: 2019-06-21
• 公開（公告）號: CN110229863A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜玉枝;楊紅霞;肖遠燦;李岑;畢宏濤;張明;魏立新
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K14/47;A61P19/10
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，包括以下步驟：

⑴將新鮮帶離皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干凈，經(jīng)紫外燈照射，得到輻照后的牦牛皮；

⑵所述輻照后的牦牛皮切割成1~3cm的塊，沸水中提取5~30分鐘后取出，用多刺板刺穿牦牛皮；

⑶將所述步驟⑵所得的牦牛皮放入質(zhì)量濃度為1%~10%的酶解液中酶解，過濾，分別得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液；所述牦牛皮與所述酶解液的質(zhì)量比為1：10~1：20；

⑷所述酶解后的牦牛皮中加入其質(zhì)量8~15倍的水煮沸5~40分鐘，得到濾液；

⑸所述濾液中加入其質(zhì)量3~10%的活性炭，充分攪拌后靜置0.5~8小時，過濾，得到濾渣；

⑹所述濾渣放入質(zhì)量濃度為0.5%~8%的酶解液中酶解，過濾，得到第二次酶解溶液；所述濾渣與所述酶解液的質(zhì)量比為1：8~1：15；

⑺將所述第一次酶解溶液與所述第二次酶解溶液合并后煮沸5~40分鐘，經(jīng)離心分離，得到上清液；

⑻所述上清液采用串聯(lián)式膜分離，截取分子量為72~130 kDa的牦牛皮Ⅰ型膠原和角蛋白，該牦牛皮Ⅰ型膠原和角蛋白經(jīng)冷凍干燥，即得牦牛膠。

2.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑴中紫外燈照射條件是指輻射波長為200nm~275nm，照射時間為0.3~2.0小時。

3.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑶中質(zhì)量濃度為1%~10%的酶解液是指在1L去離子水中加入10~100g蛋白酶，混合均勻而得的溶液。

4.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑶中酶解條件是指溫度為30~45℃，時間為0.5~8小時。

5.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑹中質(zhì)量濃度為0.5%~8%的酶解液是指在1L去離子水中加入5~80g蛋白酶，混合均勻而得的溶液。

6.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑹中酶解條件是指溫度為30~60℃，時間為0.5~12小時。

7.如權(quán)利要求3或5所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述蛋白酶是指菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、巰基蛋白酶、堿性蛋白酶、復合蛋白酶、鏈霉菌角質(zhì)蛋白酶、酵母菌酶中的一種或兩種及以上的復合物。

8.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑺中離心分離的條件是指速率為15000~25000rpm，時間為5~60min。

9.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑻中串聯(lián)式膜分離是指將數(shù)個孔徑為0.01~200μm的超濾膜設(shè)備串聯(lián)在一起。

10.如權(quán)利要求1所述的一種增強成骨細胞能力的牦牛膠制備方法，其特征在于：所述步驟⑻中冷凍干燥的條件是指溫度為-10~-50℃，時間為2~48小時。