[發(fā)明專利]DNA納米球及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910542713.3
• 申請日: 2019-06-21
• 公開（公告）號: CN112111560B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳瑩;楊晉;徐崇鈞;黃鑫;趙勝明;章文蔚;陳奧
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳華大智造科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6874;C12N15/11
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種DNA納米球的制備方法，其特征在于，包括：

基于環(huán)狀單鏈DNA進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增，以便獲得所述DNA納米球；

其中，利用具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)和至少兩條擴(kuò)增引物進(jìn)行所述滾環(huán)擴(kuò)增，

所述具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)選自下列中的至少一種：

三聚氰酸（Cyanuric?Acid），三聚氰胺（Melamine），螺環(huán)亞氨基乙內(nèi)酰脲（spiroiminodihydamoin），胍基乙內(nèi)酰脲（Guanidinehydantoin），草尿酸（oxaluric?acid）或惡唑酮（oxazolone）。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在相同的滾環(huán)擴(kuò)增時(shí)間內(nèi)，相較于一條擴(kuò)增引物，利用具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)和至少兩條擴(kuò)增引物進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增，所述DNA納米球用于測序具有提高的測序質(zhì)量。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，在相同的滾環(huán)擴(kuò)增時(shí)間內(nèi)，相較于一條擴(kuò)增引物，利用具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)和至少兩條擴(kuò)增引物進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增，所述DNA納米球的拷貝數(shù)至少增加了一倍。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，相較于一條擴(kuò)增引物，利用具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)和至少兩條擴(kuò)增引物進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增，所述DNA納米球用于測序具有降低的重復(fù)序列比例。

5.一種DNA納米球，其特征在于，所述DNA納米球中結(jié)合有具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)；所述DNA納米球通過權(quán)利要求1~4中任一項(xiàng)所述的制備方法獲得。

6.一種芯片，其特征在于，所述芯片上固定有權(quán)利要求5所述的DNA納米球。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的芯片，其特征在于，所述DNA納米球通過網(wǎng)狀小孔或者六甲基二硅氮烷固定在所述芯片上。

8.一種基于DNA樣本的測序方法，其特征在于，包括：

將所述DNA樣本進(jìn)行片段化處理，末端修復(fù)，以便獲得經(jīng)修復(fù)的DNA片段；

基于所述經(jīng)修復(fù)的DNA片段，連接測序接頭，進(jìn)行環(huán)化處理，以便獲得環(huán)狀單鏈DNA；

基于所述環(huán)狀單鏈DNA，根據(jù)權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的制備方法制備DNA納米球；

將所述DNA納米球固定到芯片上，測序，以便獲得所述DNA樣本的測序結(jié)果。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的測序方法，其特征在于，所述DNA樣本為全基因組DNA。

10.一種提高測序質(zhì)量的方法，其特征在于，根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的測序方法對DNA樣本進(jìn)行測序。

11.具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)和至少兩條擴(kuò)增引物在制備DNA納米球領(lǐng)域中的用途，其特征在于，所述具有胡斯坦面結(jié)構(gòu)的物質(zhì)選自下列中的至少一種：三聚氰酸（CyanuricAcid），三聚氰胺（Melamine），螺環(huán)亞氨基乙內(nèi)酰脲（spiroiminodihydamoin），胍基乙內(nèi)酰脲（Guanidinehydantoin），草尿酸（oxaluric?acid）或惡唑酮（oxazolone）。