[發明專利]UPLC-MS法鑒定桂枝芍藥知母湯中主要有效成分

在審

• 申請號: 201910542068.5
• 申請日: 2019-06-21
• 公開（公告）號: CN112114056A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 黃勤挽;耿福能;覃藝;譚瑾;沈詠梅;高永翔;曾海蓉
• 申請（專利權）人: 好醫生藥業集團有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種UPLC?MS法鑒定桂枝芍藥知母湯中主要有效成分，涉及中藥復方制劑的檢測技術領域。通過對桂枝芍藥知母湯的提取物進行梯度洗脫，再采用電噴霧離子源，在正、負離子模式下進行掃描，共觀察到31個主要色譜峰，鑒定出其中的28個化合物。本發明能夠同時并快速的檢測桂枝芍藥知母湯中的有效成分，實現對桂枝芍藥知母湯中成分的鑒定分析，為后續的桂枝芍藥知母湯的質量分析和質量控制提供更多的依據，也為復方制劑的成分分析及質量控制提供方法參考。

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，具體涉及一種UPLC-MS法鑒定桂枝芍藥知母湯中主要有效成分。

背景技術

桂枝芍藥知母湯出自《金匱要略·中風歷節病脈證治篇》，由桂枝、芍藥、知母、甘草、防風、白術、麻黃、生姜、麻黃九味藥組成，是治療痹癥的經典名方，具有祛風除濕、溫經散寒、滋陰清熱的功效。

目前對桂枝芍藥知母湯的研究主要集中于其藥效學研究，，如類風濕關節炎等，對其有效成分的研究較少，董運茁HPLC同時測定桂枝芍藥知母湯中7個有效成分的含量，也僅僅只能分析其中7種成分，不能有效反映出桂枝芍藥知母湯的質量；覃藝采用HPLC 指紋圖譜對桂枝芍藥知母湯中的成分進行了分析，共標定了26個共有峰，但僅指認了 8個色譜峰；上述所采用的HPLC的檢測時間過長，檢測的成分也有限。而中藥復方制劑含有多種活性成分，僅控制少數化學成分不能完全控制其質量并反映臨床療效，本申請采用超高效液相色譜-飛行時間質譜(UPLC-Q-tof-MS)聯用技術，對桂枝芍藥知母湯中的成分做了進一步的分析、鑒定，為其質量評價和控制提供更多的依據。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種UPLC-Q-tof-MS法鑒定桂枝芍藥知母湯中主要有效成分，具體內容如下：

一種鑒定桂枝芍藥知母湯中主要有效成分的方法，所述的方法為超高效液相高分辨飛行時間質譜法UPLC-Q-tof-MS，具體色譜條件與質譜條件如下：

a.色譜條件

色譜柱：BEH C18，2.1*100mm，1.7um，Waters；流動相：A為乙腈，B為0.1％甲酸水；柱溫：45℃；流速：0.40mL/min；進樣體積：1uL；進行梯度洗脫；

梯度洗脫程序見下表：

b.質譜條件

電離模式：電噴霧電離，正離子模式/負離子模式；毛細管電壓：2.0kv；錐孔電壓：40V；離子源溫度：120℃；脫溶劑溫度：400℃；脫溶劑氣流速度：800L/hr；掃描模式： MSe；碰撞能范圍：25-45ev。

進一步，通過該方法從桂枝芍藥知母湯中篩選并鑒定出28個化合物，分別為：蘋果酸、檸檬酸、麻黃堿、沒食子酸、偽麻黃堿、3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid、新芒果苷、芍藥內酯苷、芒果苷、芍藥苷、升麻素苷、異佛萊心苷、芹糖甘草苷、甘草苷、 5-O-甲基維斯阿米醇苷、知母皂苷E1、知母皂苷N、知母皂苷B2、知母皂苷D、異甘草苷、甘草素、知母皂苷C、22β-acetoxyglycyrrhiz in、Licoricesaponin E2、知母皂苷I、Licoricesaponin G2、甘草酸。

進一步，所述的桂枝芍藥知母湯的樣品制備方法為：

①稱取桂枝、白芍、甘草、麻黃、知母、生姜、白術、防風、炮附片飲片，加純凈水浸泡，武火煮沸，文火微沸至400mL，過濾，冷凍干燥，制得桂枝芍藥知母湯物質基準；

②取桂枝芍藥知母湯物質基準凍干粉加水溶解后，加乙醇，放置24h后，取上清液濃縮至無醇味，制得桂枝芍藥知母湯供試品凍干粉。

進一步，所述的桂枝芍藥知母湯的樣品制備方法為：