[發(fā)明專利]一種兔病毒性出血癥、巴氏桿菌病、波氏桿菌病三聯(lián)滅活疫苗及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910540974.1 | 申請日： | 2019-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN110201153B | 公開（公告）日： | 2022-08-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳輝;張小軍;宋曉飛;葛平萍;秦緒偉;張娣;李金波;賈愛琴;王蕾;徐龍濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 齊魯動物保健品有限公司 |
| 主分類號： | A61K39/23 | 分類號： | A61K39/23;A61P31/20;A61K39/102;A61K39/02;A61P31/04 |
| 代理公司： | 北京君智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11305 | 代理人： | 鄭明 |
| 地址： | 250100 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 病毒性 出血 桿菌 三聯(lián) 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種兔病毒性出血癥、巴氏桿菌病、波氏桿菌病三聯(lián)滅活疫苗，其特征在于，該滅活疫苗的有效成分為重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株表達(dá)的兔病毒性出血癥病毒VP60蛋白、多殺性巴氏桿菌、支氣管敗血波氏桿菌的滅活抗原；
所述疫苗用于同時預(yù)防兔病毒性出血癥、兔多殺性巴氏桿菌病A型、兔支氣管敗血波氏桿菌病；
所述疫苗的生產(chǎn)菌毒株分別為保藏編號為CGMCC No.8052的重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株，保藏編號為CGMCC No.17688的多殺性巴氏桿菌QLT-1株和保藏編號為CGMCC No.17689的支氣管敗血波氏桿菌JN01株，以上菌毒種已于2013年08月02日和2019年05月16日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏；
所述疫苗的制備方法包括以下步驟：
（1）重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株半成品制備：將重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株基礎(chǔ)毒種接種Sf9細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，對收獲的細(xì)胞培養(yǎng)物采用BEI滅活劑進(jìn)行滅活，滅活結(jié)束后需進(jìn)行滅活檢驗，滅活檢驗方法為MTT相對效力法；
（2）多殺性巴氏桿菌QLT-1株半成品制備：將多殺性巴氏桿菌QLT-1株菌種接種含0.1%裂解血球全血及0.1%小牛血清改良馬丁肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，對收獲的菌液采用甲醛滅活劑進(jìn)行滅活，滅活結(jié)束后，取樣接種含0.1%裂解血球全血及4%小牛血清的改良馬丁肉湯瓊脂平板進(jìn)行滅活檢驗，應(yīng)無菌生長；
（3）支氣管敗血波氏桿菌JN01株半成品制備：將支氣管敗血波氏桿菌JN01株菌種接種含0.1%裂解血球全血及0.1%小牛血清改良馬丁肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，對收獲的菌液采用甲醛滅活劑進(jìn)行滅活，滅活結(jié)束后，取樣接種含0.1%裂解血球全血及4%小牛血清的改良馬丁肉湯瓊脂平板進(jìn)行滅活檢驗，應(yīng)無菌生長；
疫苗配制：抗原含量按每毫升疫苗中含重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株細(xì)胞培養(yǎng)物血凝效價應(yīng)≥1:512，含多殺性巴氏桿菌菌數(shù)應(yīng)≥3.0×109CFU，含支氣管敗血波氏桿菌菌數(shù)應(yīng)≥6.0×109CFU的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配苗，加入佐劑和硫柳汞并充分混勻，所述疫苗含有氫氧化鋁膠佐劑，抗原與氫氧化鋁膠配苗比例為9:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種兔病毒性出血癥、巴氏桿菌病、波氏桿菌病三聯(lián)滅活疫苗，其特征在于，所述該疫苗制備方法步驟（1）中接種細(xì)胞為Sf9細(xì)胞，接種密度為1.5×106～2.0×106個細(xì)胞/ml，27℃培養(yǎng)，待細(xì)胞密度高于3.0×106個細(xì)胞/ml時，補(bǔ)加細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)到1.5×106～2.0×106個細(xì)胞/ml時，按MOI=0.5～2.0接種重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株，27℃培養(yǎng)72～96h，收獲細(xì)胞培養(yǎng)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種兔病毒性出血癥、巴氏桿菌病、波氏桿菌病三聯(lián)滅活疫苗，其特征在于，所述該疫苗的制備方法步驟（1）獲得的重組苜蓿銀粉夜蛾核型多角體病毒rBac-HBM-HS4-VP60株細(xì)胞培養(yǎng)物，滅活檢驗合格后需進(jìn)行兔病毒性出血癥病毒血凝試驗方法進(jìn)行測定，對1%人O型紅細(xì)胞血凝效價應(yīng)不低于1:8192。
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