[發明專利]用于檢測分泌型PD-L1拼接變體的RT-PCR引物、試劑盒及鑒定方法

在審

• 申請號: 201910536704.3
• 申請日: 2019-06-20
• 公開（公告）號: CN112111574A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 周軍
• 申請（專利權）人: 鋒宏生物醫藥科技（昆山）有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 昆山中際國創知識產權代理有限公司 32311
• 代理人: 盛建德;陳寧

本發明公開了一種用于檢測分泌型PD?L1拼接變體的RT?PCR引物、試劑盒及鑒定方法，其設計針對PD?L1的三個拼接變體的特異性引物對，以提取自各腫瘤細胞的總RNA經逆轉錄所形成的cDNA作為模板，進行PCR擴增實驗，能夠準確的檢測出PD?L1三個拼接變體是否存在于肺癌腫瘤、多發性骨髓瘤和淋巴瘤上，使用試劑盒配合常規PCR反應，能夠有效的縮短檢測時間，提高檢測鑒定的時間效率，能夠為肺癌、多發性骨髓瘤和淋巴瘤的確診提供一定的臨床支撐。

技術領域

本發明涉及一種RT-PCR引物、試劑盒及鑒定方法，尤其涉及一種用于檢測分泌型PD-L1拼接變體的RT-PCR引物、試劑盒及鑒定方法，特別是用于檢測分泌型PD-L1拼接變體存在與肺癌腫瘤、多發性骨髓瘤和淋巴瘤上的RT-PCR引物、試劑盒及鑒定方法，屬于生物醫學檢測技術領域。

背景技術

肺癌是發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一，近50年來許多國家都報道肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發病率占第二位，死亡率占第二位。

多發性骨髓瘤(MM)是一種惡性漿細胞病，其腫瘤細胞起源于骨髓中的漿細胞，而漿細胞是B淋巴細胞發育到最終功能階段的細胞，因此多發性骨髓瘤可以歸到B淋巴細胞淋巴瘤的范圍。目前WHO將其歸為B細胞淋巴瘤的一種，稱為漿細胞骨髓瘤/漿細胞瘤，其特征為骨髓漿細胞異常增生伴有單克隆免疫球蛋白或輕鏈(M蛋白)過度生成，極少數患者可以是不產生M蛋白的未分泌型MM。多發性骨髓瘤常伴有多發性溶骨性損害、高鈣血癥、貧血、腎臟損害，由于正常免疫球蛋白的生成受抑，因此容易出現各種細菌性感染，其發病率估計為2-3/10萬，男女比例為1.6:1，大多患者年齡大于40歲。

淋巴瘤是起源于淋巴造血系統的惡性腫瘤，主要表現為無痛性淋巴結腫大，肝脾腫大，全身各組織器官均可受累，伴發熱、盜汗、消瘦、瘙癢等全身癥狀。

根據瘤細胞分為非霍奇金淋巴瘤(NHL)和霍奇金淋巴瘤(HL)兩類。病理學特征在霍奇金淋巴瘤為瘤組織內含有淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、漿細胞和特異性的里-斯(Reed-Steinberg)細胞，HL按照病理類型分為結節性富含淋巴細胞型和經典型，后者包括淋巴細胞為主型、結節硬化型、混合細胞型和淋巴細胞消減型。NHL發病率遠高于HL，是具有很強異質性的一組獨立疾病的總和，病理上主要是分化程度不同的淋巴細胞、組織細胞或網狀細胞，根據NHL的自然病程，可以歸為三大臨床類型，即高度侵襲性、侵襲性和惰性淋巴瘤。根據不同的淋巴細胞起源，可以分為B細胞、T細胞和NK細胞淋巴瘤。

根據臨床癥狀、體征、影像學檢查和組織病理學檢查做出診斷，肺癌的早期診斷具有重要意義，只有在病變早期得到診斷和治療，才能獲得較好的療效。

出現肺癌原發癥狀或轉移癥狀者及時做胸部X線片檢查或胸部CT檢查，發現肺部有腫塊陰影時，應首先考慮到肺癌的診斷，應作進一步檢查，經過組織病理學檢查明確診斷；某些慢性疾病(如風濕系統疾病、慢性結核感染、腎病、慢性肝病等)或淋巴瘤等可引起反應性漿細胞增多癥和意義未明單克隆丙球蛋白血癥(MGUS)，需要與MM進行鑒別診斷；此外，一些嚴重骨質疏松或低磷性骨病或轉移癌需要與MM的骨質破壞鑒別；淋巴瘤臨床表現多樣，雖然可以有慢性、進行性、無痛性淋巴結腫大，但也可以表現為其他系統受累或全身癥狀，臨床上懷疑淋巴瘤時，可以做淋巴結或其他受累組織或器官的病理切片檢查(活檢)以確診。