[發明專利]一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，制備方法，檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201910534240.2
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN110146702A
• 公開（公告）日: 2019-08-20
• 發明（設計）人: 康潤敏;謝晶;于吉鋒;林毅;曹冶;李興玉;葉勇剛;肖璐;潘夢;葉健強
• 申請（專利權）人: 四川省畜牧科學研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

1.一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，其特征在于，包括底板以及與底板上邊緣粘結的吸水材料，在所述底板上表面沿層析方向依次鋪設有樣品墊，膠體金結合墊和預先點有T線和C線的硝酸纖維素膜，且所述硝酸纖維素膜的上邊緣與所述吸水材料的下邊緣搭接，所述硝酸纖維素膜的下邊緣與所述膠體金結合墊的上邊緣粘結，所述膠體金結合墊的下邊緣與所述樣品墊的上邊緣粘結，所述T線上包被有傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，其特征在于，所述膠體金結合墊上添加有膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結合物，優選的，所述膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結合物為膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結合物的稀釋液，所述膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結合物的稀釋比例為1：3－4.2，單位體積膠體金標記所述傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體的最低量為10ug；

優選的，所述稀釋比例為1：4。

3.根據權利要求1所述的檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，其特征在于，所述T線上傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體的添加量為36－51ug，所述C線上包被有X抗鼠IgG抗體，所述X為羊，兔，豬，馬和猴中的任意一種，所述X抗鼠IgG抗體的添加量為24－30ug；

優選的，所述T線上傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體的添加量為45ug，所述C線上包被有羊抗鼠IgG抗體，所述羊抗鼠IgG抗體的添加量為30ug。

4.根據權利要求1所述的檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜為Millipore HF135，Whatman Immunopore PR，Whatman PRIMA40和賽多利斯CN140中的任意一種；

優選的，所述硝酸纖維素膜為賽多利斯CN140。

5.一種如權利要求1-4任一項所述的檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提供吸水材料、預先點有T線和C線的硝酸纖維素膜、膠體金結合墊和樣品墊，所述T線上預先包被有傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體；

(2)將所述吸水材料、所述硝酸纖維素膜、所述膠體金結合墊以及所述樣品墊依次鋪設在底板上，使所述硝酸纖維素膜的上邊緣與所述吸水材料的下邊緣搭接，所述硝酸纖維素膜的下邊緣與所述膠體金結合墊的上邊緣粘結，所述膠體金結合墊的下邊緣與所述樣品墊的上邊緣粘結，以形成檢測試紙條大板。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，制備所述預先點有T線和C線的硝酸纖維素膜具體包括如下步驟：先用PBS將傳染性喉氣管炎病毒單抗和X抗鼠IgG抗體分別稀釋至1.2－1.7mg/ml和0.8－1.1mg/ml，然后在硝酸纖維素膜上以1ul/cm的點樣量噴涂傳染性喉氣管炎病毒單抗作為T線，以1ul/cm的點樣量噴涂X抗鼠IgG抗體作為C線，同時保證T線與C線的距離為0.5－0.8cm；

優選的，所述T線與C線的距離為0.5cm。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，還包括膠體金結合墊的制備，具體包括用膠體金在pH為8.0-8.1的條件下標記傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體；

優選的，膠體金在pH為8.0的條件下標記傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體。

8.一種使用如權利要求1-4任一項所述的試紙條檢測傳染性喉氣管炎病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：在樣品墊上加入待檢樣本20－100ul，在加樣5－10min后觀察顯色結果。

9.根據權利要求8所述的試紙條檢測傳染性喉氣管炎病毒的方法，其特征在于，所述待檢樣本為血清，血漿，細胞培養物上清，尿液，動物組織裂解液和植物組織裂解液中的任意一種。

10.一種傳染性喉氣管炎病毒檢測試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1所述的試紙條，所述檢測試劑盒的檢測限為100ng/ml。