[發(fā)明專利]一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，制備方法，檢測方法及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910534240.2
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN110146702A
• 公開（公告）日: 2019-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 康潤敏;謝晶;于吉鋒;林毅;曹冶;李興玉;葉勇剛;肖璐;潘夢;葉健強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 四川省畜牧科學(xué)研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發(fā)明公開了一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，制備方法，檢測方法及試劑盒，涉及傳染性喉氣管炎病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體包括底板以及與底板上邊緣粘結(jié)的吸水材料，在底板上表面沿層析方向依次鋪設(shè)有樣品墊，膠體金結(jié)合墊和預(yù)先點(diǎn)有T線和C線的硝酸纖維素膜，且硝酸纖維素膜的上邊緣與吸水材料的下邊緣搭接，硝酸纖維素膜的下邊緣與膠體金結(jié)合墊的上邊緣粘結(jié)，膠體金結(jié)合墊的下邊緣與樣品墊的上邊緣粘結(jié)，T線上包被有傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體。該試紙條檢測傳染性喉氣管炎病毒特異性高，重復(fù)性好，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及傳染性喉氣管炎病毒檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，制備方法，檢測方法及試劑盒。

背景技術(shù)

目前，雞傳染性喉氣管炎(AILT)是由傳染性喉氣管炎病毒(infectiouslaryngotracheitis virus，ILTV)引起的一種急性、接觸性上呼吸道傳染病，該病傳播速度快。自1925年在美國洛島發(fā)現(xiàn)該病以來，現(xiàn)已遍及世界各地養(yǎng)雞區(qū)域。該病的主要病變在喉部和氣管組織，臨床特征為呼吸困難、咳嗽、咳出帶血樣的滲出物。易感雞群一旦感染此病，傳播迅速，感染率達(dá)90％以上，病死率平均在10％～20％，蛋雞感染后產(chǎn)蛋量下降，給養(yǎng)雞業(yè)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。該病的臨診癥狀和病理變化易與其他病毒引起的疾病如傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)、新城疫病毒(newcastle diseasevirus，NDV)等相混淆，容易發(fā)生誤診，給臨床診斷帶來一定的困難，因此通常需要借助實(shí)驗室方法加以確診，而實(shí)驗室方法確診時間長，不利于實(shí)際生產(chǎn)中的快速檢測。

免疫膠體金技術(shù)(Immune colloidal gold technique)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸(HAuCl₄)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，稱為膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)形成牢固的結(jié)合，由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合，所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外，還可以與許多其它生物大分子結(jié)合，如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng)，加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性，因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域，具有方便快捷，低成本、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)勢。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條。該試紙條可以利用膠體金免疫層析法快速檢測傳染性喉氣管炎病毒。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條的制備方法。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種試紙條檢測傳染性喉氣管炎病毒的方法，該檢測方法特異性高，重復(fù)性好，靈敏度高。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種傳染性喉氣管炎病毒檢測試劑盒，該檢測試劑盒具有操作方便、檢測樣本范圍廣、檢測速度快、靈敏度高的優(yōu)勢。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的試紙條，包括底板以及與底板上邊緣粘結(jié)的吸水材料，在底板上表面沿層析方向依次鋪設(shè)有樣品墊，膠體金結(jié)合墊和預(yù)先點(diǎn)有T線和C線的硝酸纖維素膜，且硝酸纖維素膜的上邊緣與吸水材料的下邊緣搭接，硝酸纖維素膜的下邊緣與膠體金結(jié)合墊的上邊緣粘結(jié)，膠體金結(jié)合墊的下邊緣與樣品墊的上邊緣粘結(jié)，T線上包被有傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體。

在本發(fā)明應(yīng)用較佳的實(shí)施例中，上述膠體金結(jié)合墊上添加有膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結(jié)合物，膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結(jié)合物為膠體金－傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體結(jié)合物的稀釋液，稀釋比例為1：3－4.2，傳染性喉氣管炎病毒單克隆抗體穩(wěn)定1mL膠體金所需的最小抗體量為10ug/ml；