[發明專利]基于間充質干細胞外泌體的水凝膠及其噴霧劑的制備方法

有效

• 申請號: 201910532483.2
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN110755365B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 廉云飛;陸曉;強斌;黃靜;韓靜妮
• 申請（專利權）人: 江蘇拓弘康恒醫藥有限公司
• 主分類號: A61K9/06
• 分類號: A61K9/06;A61K35/28;A61K35/51;A61K47/26;A61L26/00;A61P17/02
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 馮瑞

本發明涉及一種基于間充質干細胞外泌體的快速凝膠化水凝膠的制備方法，其特征在于，水凝膠由凝膠原液和快速凝膠化反應溶液發生交聯反應后得到；其中，以重量為基準，所述凝膠原液包括以下比例的各組分：間充質干細胞外泌體提取液20?30份、泊洛沙姆407 10?15份、泊洛沙姆188 5?10份、高分子調節劑0.3?1份、天然高分子巰基化衍生物0.4?1份、保濕劑0.4?0.8份和水44?63份；所述凝膠原液的pH為5?6；所述快速凝膠化反應溶液為二硫代聯吡啶類巰基反應活性交聯劑的水溶液。

技術領域

本發明涉及藥物制劑領域，尤其涉及一種基于間充質干細胞外泌體的水凝膠及其噴霧劑的制備方法。

背景技術

間充質干細胞(MSC)是一種成體干細胞。MSC可以從骨髓、脂肪組織、肺、肝、脾、胎盤羊水、臍血臍帶等多種組織中分離培養獲得。他們具有自我更新能力、組織修復和免疫調節能力，可以向中胚層譜系分化，例如分化為成骨細胞、成軟骨細胞、成脂肪細胞等。還能向其他胚層譜系細胞分化，例如向表皮細胞和血管內皮細胞分化。由于MSC易于分離、擴增，有獨特的免疫表型和免疫調節的能力，因此被廣泛應用于組織修復、組織工程和器官移植免疫治療等方面。

MSC來源的外泌體是活細胞分泌的膜性囊泡，直徑約30～100nm，內含蛋白質、mRNA、microRNA等，可在細胞間進行物質傳遞，其療效類似于MSC的功能，對缺血性心臟病、腎損傷、肺損傷和腫瘤血管生成均有修復作用。如MSC來源的外泌體在腎臟損傷動物模型中可促進腎臟修復；在大腸桿菌誘導的肺損傷小鼠模型中，MSC來源的外泌體通過調控角質細胞生長因子mRNA水平，促進肺上皮修復。在肝纖維化的疾病模型中，MSC來源的外泌體主要抑制EMT減輕肝纖維化程度。外泌體可獲得與MSC輸注類似的療效，避免了干細胞治療帶來的風險，為臨床患者提供了治療新策略。

公開號為CN101338036A的中國專利公開了一種生物相容快速凝膠化水凝膠及其噴霧劑的制備方法，雖然其可以快速凝膠化，但是水凝膠的載藥性以及對于傷口的愈合效果有待提高。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的是提供一種基于間充質干細胞外泌體的水凝膠及其噴霧劑的制備方法，用于傷口修復時，凝膠原液和快速凝膠化反應溶液噴灑在傷口表面后迅速反應形成水凝膠，本發明的水凝膠可緩慢釋放間充質干細胞外泌體，提高外泌體在創傷表面的駐留時間，本發明為傷口的修復愈合提供安全、有效、應用方便的制劑。

本發明提供了一種基于間充質干細胞(MSC)外泌體的快速凝膠化水凝膠的制備方法，水凝膠由凝膠原液和快速凝膠化反應溶液發生交聯反應后得到，反應溫度為15-25℃；其中，

以重量為基準，所述凝膠原液包括以下比例的各組分：間充質干細胞外泌體提取液20-30份、泊洛沙姆407(P407)10-15份、泊洛沙姆188(P188)5-10份、高分子調節劑0.3-1份、天然高分子巰基化衍生物0.4-1份、保濕劑0.4-0.8份和水44-63份；所述凝膠原液的pH為5-6；

所述快速凝膠化反應溶液為二硫代聯吡啶類巰基反應活性交聯劑的水溶液；所述快速凝膠化反應溶液的pH為4-5。

進一步地，間充質干細胞外泌體提取液的濃度為1000-3000μg/L；間充質干細胞外泌體來源于臍帶間充質干細胞、脂肪間充質干細胞、骨髓間充質干細胞、胎盤間充質干細胞、月經血間充質干細胞或牙髓間充質干細胞中的一種。本發明利用MSC來源的外泌體具有抑制細胞損傷、誘導組織細胞增殖、促進組織修復的特性，制備出一種用于傷口修復的MSC外泌體快速凝膠化水凝膠，可以應用于修復各種原因引起的傷口。通過設置特定比例的泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的配伍，使本發明的凝膠原液常溫下為低粘度的液態，便于應用。

進一步地，間充質干細胞外泌體提取液的制備方法包括以下步驟：

采用無飼養層培養法，在無血清培養體系中培養間充質干細胞，收集純化培養液中的外泌體，即為間充質干細胞外泌體提取液。