[發(fā)明專利]酶聯(lián)免疫法在固態(tài)增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910532111.X
• 申請(qǐng)日: 2019-06-19
• 公開（公告）號(hào): CN112113823A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李福川;王慶彬;石立冉;張民;劉之廣;孔波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東蓬勃生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N1/34
• 分類號(hào): G01N1/34;G01N1/40;G01N33/58;G01N21/31
• 代理公司: 濟(jì)南竹森知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱家富

本發(fā)明公開了一種酶聯(lián)免疫法在固態(tài)增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應(yīng)用，屬于肥料檢測技術(shù)領(lǐng)域。所述酶聯(lián)免疫法包括：預(yù)處理、增效劑的克隆抗體制備和酶聯(lián)免疫檢測步驟。本發(fā)明采用酶聯(lián)免疫法具備靈敏度高、專一性強(qiáng)、操作簡單，富集率高、成本低的特點(diǎn)，為控制肥料質(zhì)量，管理肥料市場，實(shí)現(xiàn)低人工、快速、專一、批量檢測提供了可靠依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫法在固態(tài)增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應(yīng)用，屬于肥料檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

我國化肥使用中存在著5大主要問題：肥料使用過量嚴(yán)重浪費(fèi)；肥料結(jié)構(gòu)失衡；肥料檢測技術(shù)落后；肥料質(zhì)量參次不齊造成市場混亂；肥料利用率低。應(yīng)實(shí)施以“質(zhì)量替代數(shù)量”的發(fā)展戰(zhàn)略。

增效肥料是肥料中添加增效劑賦予肥料特殊功能的肥料，增效劑包括碧護(hù)、腐植酸、黃腐酸、海藻提取物、殼聚糖、DA-6、多肽、微生物及其代謝物、脲酶抑制劑和硝化抑制劑、聚谷氨酸、甜菜堿、褪黑素、植物激素類等。增效劑添加方式主要有液態(tài)溶于水溶性肥料和噴吐于肥料表面兩種。增效型肥料具有生產(chǎn)成本低、環(huán)境友好、減肥增效、促生抗逆、增產(chǎn)提質(zhì)的作用，在農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展中占有重要的地位，是肥料產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新發(fā)展的原動(dòng)力和國內(nèi)外肥料發(fā)展的趨勢。

增效劑用量閥值范圍窄，過量施用易對(duì)作物造成毒害，用量不足則作用效果微弱。水溶性肥料在使用過程中對(duì)農(nóng)業(yè)設(shè)備要求高，大多需要通過滴管、噴霧專用設(shè)備，使用成本大。固態(tài)增效型肥料通過將增效劑附著在肥料表面可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)控量。

目前，如何解決增效劑在增效肥料內(nèi)定性定量檢出問題是規(guī)范增效肥料市場，打擊假冒偽劣產(chǎn)品、清查藥肥摻混行為的關(guān)鍵點(diǎn)。但現(xiàn)有檢測方法主要有以下問題：1)單位質(zhì)量固態(tài)肥料內(nèi)增效劑含量低，雜質(zhì)分離困難，缺乏可大量分離純化的設(shè)備。例如水溶性肥料海藻提取物含量為20-40％，固態(tài)肥料海藻提取物含量為0.2-0.4％，為液態(tài)施用濃度的1/1000，這為檢測帶來了極大的挑戰(zhàn)。2)缺乏增效劑在固態(tài)增效肥料內(nèi)的檢測手段，例如微生物代謝物、碧護(hù)、脲酶抑制劑和硝化抑制劑、聚谷氨酸、甜菜堿、褪黑素、植物激素、DA-6在肥料內(nèi)的檢測目前鮮有報(bào)道；3)專一性差，例如腐植酸、黃腐酸的檢測大多通過肥料內(nèi)有機(jī)質(zhì)的檢驗(yàn)，無法有效專一性表征腐植酸、黃腐酸，部分不法企業(yè)添加淀粉假冒偽劣，給市場和用戶帶來了不可挽回的損失；4)檢測靈敏度低，分析需要分離純化出的增效劑量大。現(xiàn)有方法集中于生化比色，需要檢測樣品用量在1-5mg。5)檢測成本高、檢測設(shè)備操作復(fù)雜，例如液相、質(zhì)譜等設(shè)備聯(lián)用，設(shè)備價(jià)格在200萬左右，需要專業(yè)人員經(jīng)過長時(shí)間培訓(xùn)才能完成檢測任務(wù)，為方法的推廣帶來了較大的阻礙。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測肥料中增效劑存在專一性差、靈敏度低、干擾因素多的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種酶聯(lián)免疫法在固態(tài)增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應(yīng)用。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供技術(shù)方案如下：

酶聯(lián)免疫法在檢測固態(tài)增效肥料的痕量增效劑含量中的應(yīng)用，所述酶聯(lián)免疫法包括預(yù)處理、增效劑的克隆抗體制備和酶聯(lián)免疫檢測。

其中，所述預(yù)處理步驟，包括：

(1)選取粒徑大小均一的固態(tài)增效肥料顆粒，制得待檢測樣品顆粒；

(2)將步驟(1)的待檢測樣品顆粒用溶劑進(jìn)行表面溶解，當(dāng)溶解前的顆粒粒徑值與溶解后的粒徑值之差為0.2-0.5mm時(shí)，停止溶解，將溶解液與顆粒分離，收集顆粒表面的溶液并與溶解液合并，制得待測溶液1；

(3)對(duì)步驟(2)制得的待測溶液1進(jìn)行濃縮，低溫結(jié)晶，過濾分離處理，制得待測樣品溶液2。

進(jìn)一步的，所述步驟(1)中，固態(tài)增效肥料的肥料成分為尿素、磷酸氫二銨、磷酸二氫銨、硝酸鉀、氯化鉀、硫酸鉀中的任意一種或兩種以上任意比的混合物。