[發明專利]酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用

在審

• 申請號: 201910532111.X
• 申請日: 2019-06-19
• 公開（公告）號: CN112113823A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 李福川;王慶彬;石立冉;張民;劉之廣;孔波
• 申請（專利權）人: 山東蓬勃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/40;G01N33/58;G01N21/31
• 代理公司: 濟南竹森知識產權代理事務所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱家富

1.酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述酶聯免疫法包括：預處理、增效劑的克隆抗體制備和酶聯免疫檢測。

2.根據權利要求1所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述預處理包括：

(1)選取粒徑大小均一的固態增效肥料顆粒，制得待檢測樣品顆粒；

(2)將步驟(1)的待檢測樣品顆粒用溶劑進行表面溶解，當溶解前的顆粒粒徑值與溶解后的粒徑值之差為0.2-0.5mm時，停止溶解，將溶解液與顆粒分離，收集顆粒表面的溶液并與溶解液合并，制得待測溶液1；

(3)對步驟(2)制得的待測溶液1進行濃縮，低溫結晶，過濾分離處理，制得待測樣品溶液2。

3.根據權利要求2所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述步驟(1)中，固態增效肥料的肥料成分為尿素、磷酸氫二銨、磷酸二氫銨、硝酸鉀、氯化鉀、硫酸鉀中的任意一種或兩種以上任意比的混合物。

4.根據權利要求2所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述步驟(2)中，待檢測樣品顆粒與溶劑的質量比為10-20:1；所述溶劑為水溶液、有機溶劑，或水與有機溶劑的混合液；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、乙醚、石油醚、丙酮、二氯甲烷、氯仿、正丁醇中的一種或兩種以上任意比的組合。

5.根據權利要求2所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述步驟(2)中，收集顆粒表面的溶液的方法為將顆粒表面的溶劑吸附于吸附材料上，然后用溶劑沖洗吸附材料，獲得顆粒表面的溶液；溶劑與吸附材料的質量比為1:3-5；吸附材料為活性炭。

6.根據權利要求2所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所示步驟(3)中，濃縮為將待測溶液在50℃-70℃的條件下，濃縮至有結晶析出，制得飽和鹽溶液；結晶為將濃縮后的溶液置于4℃-20℃的條件下結晶30-60min；過濾分離處理為采用三級膜分離過濾系統進行分離過濾；所述三級膜分離過濾系統為陶瓷-超濾-納濾過濾分離系統，其中陶瓷膜規格為200nm、超濾膜規格為1～10kD、納濾膜規格為150D～600D；過濾時間10～20min。

7.根據權利要求1所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述增效劑的克隆抗體制備的方法為采用待測增效劑的標準品制備抗體。

8.根據權利要求1所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，所述酶聯免疫檢測步驟包括包被，封閉，孵一抗，孵二抗，顯色，繪制標準曲線和計算待測增效劑含量。

9.根據權利要求8所述的酶聯免疫法在固態增效肥料中檢測痕量增效劑含量的應用，其特征在于，計算待測增效劑含量的計算公式為X＝C×VF/M×100％，

式中：

X——樣品中增效劑含量；

C——根據標準曲線求得的樣品中增效劑的質量濃度(mg/ml)；

F——實驗過程中增效劑稀釋倍數；

M——樣品處理前稱取質量，單位為毫克(mg)；

V——待測樣品溶液2的體積(ml)。