[發明專利]一種基于核酸適配體和納米金的Hg2+檢測方法

有效

• 申請號: 201910523669.1
• 申請日: 2019-06-17
• 公開（公告）號: CN110412024B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 王麗;劉傳;遲恩忠;張強;曾浩楠;姚娜;胡楚玲
• 申請（專利權）人: 廣東石油化工學院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 合肥匯融專利代理有限公司 34141
• 代理人: 鄺溯瓊

本發明提供一種基于核酸適配體和納米金的Hg²⁺檢測方法，涉及Hg²⁺檢測技術領域。所述Hg²⁺檢測方法主要包括：核酸適配體的設計、標準液的制備、實驗組設立、檢測、建立標準曲線、根據標準曲線對實驗組進行定量分析等步驟。本發明克服了現有技術的不足，采用能形成莖環結構的核酸適配體作為核酸探針，加強對納米金的保護能力，且本方法的檢測線性范圍寬、抗干擾能力強、精密度高，檢測Hg²⁺離子濃度跨度達到3個數量級，適宜推廣使用。

技術領域

本發明涉及Hg²⁺檢測技術領域，具體涉及一種基于核酸適配體和納米金的Hg²⁺檢測方法。

背景技術

汞作為一種全球性的環境污染物，對人體也有著極大的毒害作用，其蓄積性，致畸、致癌作用也是非常為人們所關注，現已被我國《重金屬污染綜合防治規劃(2010—2015)》列入5種第一類重點防控重金屬中。目前對Hg²⁺的檢測方法包括原子發射光譜法、質譜法、熒光法和電化學法等，雖然這些檢測方法應用已經比較成熟，但仍存在一些弊端：用費較高、需要用到一些大型儀器、需要專業人員進行操作、不能達到快速測定的效果等。所已建立一種快速、簡單、靈敏度高的檢測方法仍是研究的熱點。

適配體(Aptamer)是通過SELEXS技術，從人工體外合成的隨機的寡核苷酸序列庫中經過反復篩選得到的，與靶分子有極高的親和性和特異性的寡核苷酸序列。納米金是指金的微小顆粒，通常在水溶液中以膠體金的形態存在。直徑在10～50nm之間的納米金粒子顏色為紅色，而粒徑大于50nm或聚集狀態的納米金粒子呈現藍色。近年來，納米金與適配體在生物分析、藥物應用、重金屬的檢測、微生物檢測上均得到了廣泛的應用。

目前基于納米金與適配體檢測Hg²⁺的方法研究已經有報道，但大多采用的是直鏈型適配體，對納米金的保護性較弱，并且檢測的抗干擾性和精密性較低。

發明內容

針對現有技術不足，本發明提供一種基于核酸適配體和納米金的 Hg²⁺檢測方法，采用能形成莖環結構的核酸適配體作為核酸探針，加強對納米金的保護能力，且本方法的檢測線性范圍寬、抗干擾能力強、精密度高，檢測Hg²⁺離子濃度跨度達到3個數量級，適宜推廣使用。

為實現以上目的，本發明的技術方案通過以下技術方案予以實現：

一種基于核酸適配體和納米金的Hg²⁺檢測方法，所述Hg²⁺檢測方法包括以下步驟：

(1)核酸適配體的設計：設計由28個堿基組成的單鏈DNA為核酸適配體，其中單鏈DNA含5′末端和3′末端相靠近的莖環發夾結構；

(2)標準液的制備：將納米金溶液和10μmol/L的核酸適配體混勻，于室溫下進行孵育，得標準液備用；

(3)實驗組設立：向上述標準液中加入待檢測含Hg²⁺樣本溶液，混勻后加入1mol/L的氯化鈉溶液，再補充緩沖液至核酸適配體濃度為 0.32μmol/L，混勻后形成實驗組備用；

(4)檢測：將上述實驗組在室溫條件下孵育一段時間，并觀察體系的顏色變化，進行定性檢測，測定520nm、620nm處的吸光度；

(5)建立標準曲線，確定最低檢出限和線性范圍；

(6)根據標準曲線對實驗組進行定量分析。

優選的，所述步驟(1)中單鏈DNA從5′端至3′的序列為GAACACCCCTTCTTCTTCCTTGTTGTTC。

優選的，所述納米金選用的粒徑為15nm，納米金溶液濃度為0.1％。