[發(fā)明專利]一種提高鉛DNAzyme穩(wěn)定性的固定化酶方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910522063.6
• 申請(qǐng)日: 2019-06-17
• 公開（公告）號(hào): CN110438115B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙慧敏;吳煒浩;譚冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/14
• 分類號(hào): C12N11/14;C12Q1/44;G01N21/64
• 代理公司: 大連理工大學(xué)專利中心 21200
• 代理人: 溫福雪;侯明遠(yuǎn)

1.一種提高鉛DNAzyme穩(wěn)定性的固定化酶方法，其特征在于，步驟如下：

(1)制備鉛DNAzyme：將序列1 FAM標(biāo)記的鉛DNAzyme底物鏈及等量序列2 BHQ1標(biāo)記的鉛DNAzyme酶鏈在25-35°C下混合均勻后，放入水浴鍋中，加熱至95°C，保持5-10min后自然冷卻至室溫，形成部分雜交的雙鏈鉛DNAzyme；

(2)制備沸石咪唑酯骨架-8固定化鉛DNAzyme：將步驟(1)制備的雙鏈鉛DNAzyme與2-甲基咪唑在水中充分?jǐn)嚢杌旌?，形成混合液A；Zn(NO₃)₂溶于水中形成溶液B；之后，將溶液B緩慢倒入混合液A中，得到的混合液在室溫下攪拌12-24h；其中Zn(NO₃)₂和2-甲基咪唑的摩爾比為1:35-1:140；依次用高純水和乙醇將得到的混合物離心清洗3-5次后冷凍干燥12-24h得到粉末狀物質(zhì)DNAzyme@ZIF-8，將其研磨并置于-4~-20°C的條件下冷凍保存；

所述的序列1：5’-FAM-CTCACTAT/rA/GGAAGAGATGATGTCTGT-3’；

所述的序列2：5’-ACAGACATCATCTCTGAAGTAGCGCCGCCGTATAGTGAG-BHQ1-3’。

2.一種提高鉛DNAzyme穩(wěn)定性的固定化酶的應(yīng)用，其特征在于，水樣中鉛離子的定量檢測(cè)：將權(quán)利要求1制備得到的DNAzyme@ZIF-8材料與HEPES緩沖液混合，其中，HEPES緩沖液中HEPES的濃度為20-50mM，NaCl的濃度為20-50mM，MgCl₂的濃度為1-5mM，HEPES緩沖液的pH=7-8；之后向混合液中加入50-550nM硝酸鉛溶液，混合物在25-37℃下反應(yīng)2-4h后，轉(zhuǎn)移到石英比色皿中，記錄體系熒光強(qiáng)度隨發(fā)射波長(zhǎng)的變化曲線。